第三章种都子扩大培养.pptVIP

* 生产过程中经常出现种子质量不稳定的现象，其主要原因是原材料质量波动。例如在四环素、土霉素生产中，配制产孢子斜面培养基用的麸皮，因小麦产地、品种、加工方法及用量的不同对孢子质量的影响也不同。制备霉菌用的大（小）米，其产地、颗粒大小、均匀程度不同，孢子质量也不同。蛋白胨加工原料不同如鱼胨或骨胨对孢子影响也不同。此外，琼脂的牌号不同，据分析其中所含无机离子的差别而引起孢子质量的变化。 * 例如土霉素生产菌种龟裂链霉菌，孢子制备时发现：在北方气候干燥地区孢子斜面长得较快，在含有少量水分的试管斜面培养基下部孢子长得较好，而斜面上部由于水分迅速蒸发呈干疤状，孢子稀少。在气温高含湿度大的地区，斜面孢子长得慢，主要由于试管下部冷凝水多而不利于孢子的形成。从表中看出相对湿度在40%~45%时孢子数量最多，且孢子颜色均匀，质量较好。 * 3，种龄 种龄：是指种子罐中培养的菌丝体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 通常种龄是以处于生命力极旺盛的对数生长期，菌体量还未达到最大值时的培养时间较为合适。时间太长，菌种趋于老化，生产能力下降，菌体自溶；种龄太短，造成发酵前期生长缓慢。 不同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种实验来确定。嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好。 * 4，接种量 * 三、种子质量的控制措施 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。因此首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。 菌种稳定性的检查 无（杂菌）检查 * 四、种子质量标准 1，细胞或菌体 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观（色素、颗粒等） 单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态； 霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。 * 2，生化指标 种子液的糖、氮、磷的含量和pH变化。 * 3，产物生成量 在抗生素发酵中，产物生成量是考察种子质量的重要指标，因为种子液中产物生成量的多少间接反映种子的生产能力和成熟程度。 * 4，酶活力 种子液中某种酶的活力，与目的产物的产量有一定的关联。 * 五、种子异常分析 菌种生长速度，过快或过慢 菌丝结团 菌丝粘壁 * 第三节 实例 一、谷氨酸发酵的菌种扩大培养 斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵罐 1，斜面菌种的培养 菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种绝对纯，不得混有任何杂菌和噬菌体，培养条件应有利于菌种繁殖，培养基以多含有机氮而不含或少含糖为原则。 (1) 斜面培养基组成 葡萄糖 0.1％ 蛋白陈 1.0％ 牛肉膏 1.0％ 氯化钠 0.5％ 琼脂 2.0~2.5％ PH 7.0~7.2 （传代和保藏斜面不加葡萄糖） (2) 培养条件：33~34℃，培养18~24h * 2， 一级种子培养 一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。 (1) 培养基组成 葡萄糖 2.5％ 尿素 0.5％ 硫酸镁 0.04％ 磷酸氢二钾 0.1％ 玉米浆 2.5~3.5％(按质增减) 硫酸亚铁、硫酸锰 各2ppm PH 7．0 * (2) 培养条件 用1000mL三角瓶装入培养基200mI，灭菌后置于冲程7．6cm、频率96次／min的往复式摇床上振荡培养12h，培养温度33~34℃ (3) 一级种子质量要求 种龄：12h pH值：6.4± 0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查： (-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应。 * 3， 二级种子培养 为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。 (1) 培养基组成 * (2)培养条件 接种量：0.8~1.0％ 培养温度：32~34℃ 培养时间：7~8h 通风量 50L种子罐1:0.5 搅拌转速340r／min； 250L种子罐1:0.3 搅拌转速300r／ min 500L种子罐1:0.25 搅拌转速230r／ min * (3)二级种子的质量要求 种龄 7~8h pH 7.2左右 OD值 净增0.5左右 无菌检查 (-) 噬菌体检查(-) * 二、啤酒酵母的扩大培养 一般可采用三级扩大培养，扩大倍数：第1级到第2级为8-10倍，第2级到第3级为4-6倍。 1，实验室扩大培养 * 2，车间扩大培养 * 第三节 生产发酵罐的无菌接种 生产