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第七章 昆虫病毒 第八章 昆虫病毒 一、昆虫病毒的研究 高尚荫(1909-1989) 中国科学院院士，病毒学家从事TMV、流感病毒、昆虫病毒等研究 二、昆虫病毒的类型 根据“Virus taxanomy1999”，昆虫病毒可分为7个科: 1、杆状病毒科（Baculoviridae） 核型多角体病毒属（Nucleopolyhedrovirus）颗粒体病毒属（Granulovirus） 2、呼肠孤病毒科（Reoviridae） 质型多角体病毒属（Cypovirus） 3、痘病毒科（Poxviridae）昆虫痘病毒亚科（Entomopoxvirinae） 4、细小病毒科（Parvoviridae）浓核病毒亚科（Densovirunae） 5、虹彩病毒科（Iridoviridae）虹彩病毒属（Iridovirus） 6、弹状病毒科（Rhabdoviridae）西格马病毒属（Sigmavirus） 7、微核糖核酸病毒科（Picornaviridae）肠道病毒属（Entervirus） 二、昆虫病毒的类型 属于13个病毒科、2个病毒亚科、21个病毒属。 病毒核酸的类型分为： DNA病毒——dsDNA病毒，包括: ①杆状病毒科；②多分DNA病毒科；③痘病毒科； ④泡囊病毒科；⑤虹彩病毒科。 DNA病毒——ssDNA病毒．包括细小病毒科。 DNA和RNA反转录病毒，包括: ①前病毒科： ②变位病毒科。 RNA病毒——dsRNA病毒，包括: ①呼肠孤病毒科：②二分RNA病毒科 RNA病毒——ssRNA病毒，包括: ①微RNA病毒科；②野田村病毒科；③T4病毒科 三、昆虫病毒的一般特性 根据包含体在寄主细胞中的部位，分为： 核型多角体病毒(NPV，nuclear polyhedrosis virus)： 寄生在寄主细胞核内，包含体内含有多个杆状病毒粒子。 质型多角体病毒(CPV,cytoplasmic polyhedrosis virus)： 寄生在寄主细胞质中，包含体内含有多个球状病毒粒子。 颗粒体病毒(GV，granulosis virus)： 在感染的细胞核里和细胞质里均可发育形成。多为椭圆形，也有肾形。每个包含体一般仅含一个杆状病毒粒子。 无包含体病毒 ： 如昆虫浓核病毒，感染病毒的宿主细胞核膨大，核内物质呈浓密、丰盈现象。 昆虫痘病毒（Vagoiavirus）:椭圆形与纺锤形包涵体存在于细胞质内，但纺锤形包涵体是不包埋病毒粒子的. “生物导弹” 病毒杀虫剂生产工艺（以NPV杀虫剂为例） 病毒杀虫剂生产工艺（以NPV杀虫剂为例） 五、杆状病毒(Baculovirus) 有包膜的超大双链闭合环状DNA病毒 (135k bp) 分类上独立为杆状病毒科(Baculovidae),分3个属： 多角体病毒属(Nucleopolyhedrovirus) 颗粒体病毒属(Granulovirus) 非包埋杆状病毒属(Nonoccluded Baculoviruses) 目前至少从600多种昆虫和其他无脊椎动物中发现各种病毒的感染——调节种群密度 感染病毒的幼虫形成大量包含体，扩散、传播 杆状病毒有宿主专一性，对脊椎动物、植物完全不感染——应用安全 五、杆状病毒(Baculovirus) 主要见于昆虫体内，是已知昆虫病毒中类群最大、发现最早、研究最多，且实用意义最大的。 主要应用: 作为载体，表达外源基因; 作为杀虫剂，有效地控制农业害虫的发生，并且对环境不造成污染。 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa Californica Nuclear Polyhedorosis Virus, AcMNPV)研究得最深入。 五、杆状病毒(Baculovirus) 形态特征： 包含体：核多角体、颗粒体 病毒粒子:有包膜、产生2种：芽生型bubed（早期）和包埋型occluded（晚期） 病理学特征： 宿主仅限于节肢动物 动作迟缓、食欲减退、虫体肿胀，轻触即破，流出浓汁（无臭），倒悬而死。 可入侵中肠组织、进入血淋巴及其他组织 从感染到死亡需5~7d。 昆虫杆状病毒表达载体系统 Baculovirus Expression Vector System，BEVS 80S初，国外学者发现多角体蛋白基因（polh)的强启动子及晚期大量表达的特性，Smith等首次建立了AcMNPV/秋黏虫细胞表达系统，表达了人β干扰素。 从此，以杆状病毒作为载体，在昆虫细胞或虫体内表达外源基因，形成了BEVS 。 早期的BEVS有很多不足，如： 重组率较低 筛选困难 操作周期长 产物不易纯化等 短短20多年时间里，随着杆状病毒分子生物学研究的不断深入，杆状病毒