姜黄素对ⅱ型糖尿病神经病理性疼痛关大鼠内质网应激蛋白bip与p--eif2α表达的影响.docxVIP

温州医学院硕士学位论文姜黄素对Ⅱ型糖尿病神经病理性痛大鼠内质网应激蛋白 温州医学院硕士学位论文 姜黄素对Ⅱ型糖尿病神经病理性痛大鼠内质网应激蛋白 BiP与p-eIF2tt的影响 硕士研究生：吴艳 导 师：曹红 中文摘要 目的观察腹腔注射100mg／kg／d姜黄素对II型糖尿病神经病理性疼痛(DNP) 大鼠机械痛敏(MWT)、热痛敏(TWL)的影响及脊髓背角和背根神经节(DRG) 中内质网应激(ERS)相关蛋白BiP和p-eIF20t表达的影响，探讨姜黄素影响其 表达机制。 方法雄性SD大鼠90只，体重160．1809，高脂高糖饲料喂养8周诱导胰岛 素抵抗后，继以单次小剂量链脲佐菌素(STZ)35mg／kg腹腔注射，3d后血糖≥ 16．7mmol／l者入选为D组(81只)，在注射STZ前和14d后采用Electronic Von Fery 触觉测痛仪和甩尾／足底测试仪测大鼠MWT、TWL，且将D组随机分为3组 (n=27)：①II型糖尿病神经病理性痛组(DNP组)：继续高脂高糖饲料喂养， 不作任何处理；②II型糖尿病神经病理性痛+姜黄素100mg／kg／d组(DCur组)： 高脂高糖饲料喂养，注射STZl4d后开始腹腔注射姜黄素100mg／kg／d，持续14d； ③Ⅱ型糖尿病神经病理性痛+溶剂对照组(DSC组)：高脂高糖饲料喂养，注射 STZl4d后开始腹腔注射玉米油4ml／kg，持续14d；另取27只大鼠为正常对照组 (N组)，给予普通饲料喂养，不作任何处理。所有组别在给姜黄素3、7、14d 后测血糖、MWT与TWL，并在同时间点取大鼠L4．6脊髓和DRG，各时间点均 9只。用免疫组织化学法测定BiP和P—eIF2ct在大鼠脊髓背角和DRG的动态变化， 用Western blot法测定大鼠脊髓背角和DRG中BiP、p-eIF2ct蛋白表达情况。 结果1．大鼠体重、血糖、胰岛素浓度及胰岛素敏感指数的变化：与N组 比较，饲养8周后D组大鼠体重明显增高(N组413．20士17．009，D组 温州医学院硕士学位论文461．08：1：29．039)(PO．05)，血糖水平也较N组增高但未达到糖尿病诊断标准(N 温州医学院硕士学位论文 461．08：1：29．039)(PO．05)，血糖水平也较N组增高但未达到糖尿病诊断标准(N 组6．34士0．46 mmol／1，D组6．53+0．36 mmol／1)，空腹胰岛素浓度也明显升高(N 组3．93+0．549M／L，D组4。50-a：0。299M／L)(氏0．05)，胰岛素敏感指数明显下降 (N组．2．7+0．35，D组．3．78+0．5 1)(P0．05)： 2．痛阈的变化：注射STZ前各组MWT(N组40．574-3．379，D组41．10士5．039)、 TWL(N组12．674-2．43s，D组12．834-1．52s)基础值无差别；与N组相比，注射 STZl4d后各组大鼠MWT降低、T、礼缩短(氏0．05)；与DNP组相比，给姜黄 素7d后DCur组大鼠MWT升高、TWL延长，在给姜黄素14d后达到明显变化 (氏O．05)；DSC组与DNP组比较，给姜黄素后各时间点MWT、TWL无明显 变化： 3．脊髓背角和DRG中BiP表达：(1)免疫组化结果显示：N组大鼠脊髓背 角及DRG仅有少量BiP的阳性细胞表达；与N组相比，DNP组、DCur组、DSC 组BiP、p-elF2a表达显著增多(氏0．05)；给姜黄素7d后，DCur组表达量开始 降低，BiP的阳性细胞率脊髓背角与DRG分别为15．00-2．24％、14．16+1．97％， 给姜黄素14d后，DCur组BiP的表达与DNP组相比差异有统计学意义(尸0．05)； 各时间点DSC组的表达与DNP组相比无差别。(2)免疫印迹法显示：N组大鼠 脊髓背角和DRG中都仅有少量BiP蛋白表达；DNP组、DCur组、DSC组脊髓 和DRG中BiP蛋白表达均较N组水平高(火O．05)；与DNP组相比，DCur组 在给姜黄素7d后表达开始降低(尸O．05)，并呈下降趋势；各时间点DSC组蛋 白表达与DNP组基本一致，两组差异无明显差异。 4．脊髓和DRG中p-elF2a表达：(1)免疫组化结果显示：N组大鼠脊髓背 角及DRG仅有少量p-elF2a的阳性细胞表达；与N组相比，DNP组、DCur组、 DSC组BiP、p-elF2a表达显著增多(PO．05)；给姜黄素7d后，DCur组表达量 开始降低，P．elF2a的阳性细胞率脊髓背角与DRG分别为8．74+1．09％、 7．96+0．55％；给姜黄素1 4d后，DCur组p-elF2a的表达与DNP组相比差异有统 计学意义(P0．05)：各时间点DSC组的表达与DNP组相比无差别。(2)免疫