酿酒酵母菌关键酶基没因剔除对谷胱甘肽及氨基酸合成的影响-生物学、动物学专业毕业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 Lanzhou Lanzhou University 兰州大学硕士研究生学位论文 原创性声明 本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进 行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、 数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究 成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：挲』壶盘!日 兰州大学硕上研究生学位论文关于学位论文使用授权的声明 兰州大学硕上研究生学位论文 关于学位论文使用授权的声明 本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归 属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定， 同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版， 允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用任何复制手段保存和 汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相 关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者繇·粒掾臌名：锹日期：业1纱 Il Lanzhou Lanzhou University 兰州大学硕士研究生学位论文 中文摘要 谷胱甘肽是由L谷氨酸、L广半胱氨酸和甘氨酸缩合而成的一种同时含有，，．谷氨 酰基和巯基的生物活性三肽化合物。谷胱甘肽在生物体内具有多种重要的生理功能， 特别是对于维持生物体内适宜的氧化还原环境起着至关重要的作用，在临床医药、食 品工业、体育运动及有关生物研究领域有着广泛的用途。 Y．胱硫醚裂解酶(Y．CTL舾e)和B．胱硫醚合成酶(B．CTSase)是酿酒酵母半胱氨 酸合成通路上的关键酶，调控两种酶的相应基因分别是CYS3和CYS4；Y．谷氨酰半胱 氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶分别是谷胱甘肽生物合成第一步和第二步反应的关键 酶，调控两种酶的基因分别是GSHl和GSH2。利用基因重组技术分别构建CYS3基因剔 除菌、CYS4基因剔除菌和GSHl基因剔除菌和GSH2基因剔除菌，然后通过对比野生茵 与突变酵母菌生长曲线并定量检测两者中谷胱甘肽和氨基酸的含量，得出CYS3基因、 CYS4基因和GSHl基因和GSH2基因剔除对谷胱甘肽和氨基酸代谢的影响程度。根据摇 瓶实验结果，与野生菌株相比，CYS3基因剔除菌中谷胱甘肽含量降低了26．1％，CYS4 基因剔除菌中谷胱甘肽含量提高了6％，GSHl基因剔除菌中谷胱甘肽含量降低了 18．5％，GSH2基因剔除菌中谷胱甘肽含量降低了4．17％。这对谷胱甘肽合成工艺提供 了理想依据，也就是说CYS4基因突变能提高合成谷胱甘肽的量；而CYS3基因和GSHl 基因的剔除使得谷胱甘肽合成量明显下降，提示克隆此两种关键酶做成基因工程菌能 显著提高谷胱甘肽合成的产量。 综合CYS3、CY4和GSHl、GSH2基因剔除和其它在谷胱甘肽代谢途径中关键酶基 因剔除实验结果所得数据，可以建立酿酒酵母谷胱甘肽代谢网络系统生物学模型。 关键词：基因剔除；SFH．PCR；Y．胱硫醚裂解酶；13．胱硫醚合成酶；Y．谷氨酰半 胱氨酸合成酶；谷胱甘肽合成酶；谷胱甘肽合成，系统生物学 AbstractGlutathione Abstract Glutathione is a tripeptide compound，it is condensed from L-glutamate，L-cysteine and glycine，containing biological activity both T-glutaminyl and sulfhydryl． Glutathione have a variety of important physiological functions in the body，especially plays a vital role for maintaining appropriate redox environment in organisms，and share a wide range of uses in the area of clinical medicine，food industry，sports and biological research． Cystathionine 13-synthase(13-CTSase)and cystathionine Y—lyase(Y—CTLase) ale the key enzyme on cysteine biosynthesis in Saccharomyces