第7章微生洗物遗传.ppt

第八章 微生物遗传 第七节 菌种选育 一、新种分离、筛选的原则与步骤： 1、获得菌种的途径： （1）根据文献资料向其他单位索取； （2）现有菌种经诱变育种，选出符合生产的新菌株； （3）根据工艺要求，从特定生态环境中分离自然菌株。 2、筛选新种具体步骤 （1）采样： （2）增殖：控制营养；控制温度和PH；加抑制剂。 （3）分离：稀释分离法；划线分离法；组织分离法。 (4)性能鉴定：菌株的毒性试验和投产性能测试。 二、诱变育种 1、诱变育种的基本环节： 2、诱变育种工作中应考虑的几个原则： （1）选择简便有效的诱变剂： （2）挑选优良的出发菌株： （3）处理单孢子（或单细胞）悬液： （4）选用最适剂量： （5）充分利用复合处理的协同效应： （6）利用和创造形态、生理与产量间相关指标 （7）设计或采用高效筛选方案。 3、营养缺陷型的筛选 （1）诱发或自发突变： （2）选择：淘汰野生型，选择营养缺陷型。 （3）鉴定： （4）测定应用效果： 选择营养缺陷型方法： 青霉素浓缩法： 过滤浓缩法： 限量补充培养法： 夹层培养法： 影印培养法： （参见P228） 转导噬菌体为什么“错” 将宿主的DNA包裹进去? 噬菌体的DNA包装酶也能识别染色体DNA上类似pac的位点 并进行切割，以“headful”的包装机制包装进P22噬菌体外壳， 形成只含宿主DNA的转导噬菌体颗粒（假噬菌体）。 因为染色体上的pac与P22 DNA的pac序列不完全相同， 利用效率较低，这种“错装”机率一般仅约10-6-10-8 形成转导颗粒的噬菌体可以是温和的也可以是烈性的，但必须 具有能偶尔识别宿主DNA的包装机制并在宿主基因组完全降解 以前进行包装。 普遍性转导的基本要求： （参见P228） 普遍性转导的三种后果： 进入受体的外源DNA通过与细胞染色体 的重组交换而形成稳定的转导子 流产转导（abortive transduction） 转导DNA不能进行重组和复制，但其 携带的基因可经过转录而得到表达。 特点：在选择培养基平板上形成微小菌落 外源DNA被降解，转导失败。 DNA不能复制，因此群体中仅一个细胞含有DNA， 而其它细胞只能得到其基因产物，形成微小菌落。 2、局限性转导（specialized transduction） （参见P229） 温和噬菌体感染 整合到细菌染色体的特定位点上 宿主细胞发生溶源化 溶源菌因诱导而发生裂解时， 在前噬菌体二侧的少数宿主 基因因偶尔发生的不正常切 割而连在噬菌体DNA上 部分缺陷的温和噬菌体 把供体菌的少数特定基因转移到受体菌中 2、局限性转导（specialized transduction） 温和噬菌体λ裂解时的 不正常切割：包含gal或bio基因 （几率一般仅有10-6） 缺陷噬菌体在宿主细胞内能够象正常的λDNA分子一样进行复制、 包装，提供所需要的裂解功能，形成转导颗粒。 但没有正常噬菌体的溶源性和增殖能力，感染受体细胞后，通过 DNA整合进宿主染色体而形成稳定的转导子。 局限性转导与普遍性转导的主要区别： a）被转导的基因共价地与噬菌体DNA连接，与噬菌体DNA一起 进行复制、包装以及被导入受体细胞中。而普遍性转导包装的 可能全部是宿主菌的基因。 b）局限性转导颗粒携带特定的染色体片段并将固定的个别基因 导入受体，故称为局限性转导。而普遍性转导携带的宿主基 因具有随机性。 2、局限性转导（specialized transduction） （参见P229） 溶源转变（lysogenic conversion）： 一个与转导相似又不同的现象 温和噬菌体感染细胞后使之发生溶源化，因噬菌体的基因 整合到宿主染色体上，而使后者获得了新性状的现象。 溶源转变与转导的不同？ a）不携带任何供体菌的基因； b）这种噬菌体是完整的，而不是缺陷的； 三、细菌的遗传转化（genetic transformation） 定义：同源或异源的游离DNA分子(质粒和染色体DNA)被自然 或人工感受态细胞摄取，并得到表达的水平方向的基因转移过程 自然遗传转化（natural genetic transformation） 人工转化（artificial transformation） 感受态细胞：具有摄取外源DNA能力的细胞 （参见P229） （competent cell） 自然感受态与人工感受态的不同？ 自然感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性， 受细菌自身的基因控制； 人工感受态则是通过人为诱导的方法，使细胞具有 摄取DNA的能力，或人为地将DNA导入细胞内。 （该过程与