ddrt-p只cr技术研究进展.pptVIP

DDRT-PCR技术及应用的研究进展 前言 基因在不同组织细胞的不同生长阶段的选择性表达决定了生物的整个生命过程——个体的生长、发育、细胞周期的调控、衰老及细胞的程序性死亡等。因此分离、鉴定差异表达的基因，研究基因转录对了解生命过程的机理、发现具有特殊功能的表达产物有着重要的意义。 DDRT—PCR 早期，从mRNA转录水平筛选差异表达基因的方法是差别筛选技术和扣除杂交法，但二者存在灵敏度低、工作量大、周期长及步骤繁琐的问题。 哈佛大学医学院Liang 和Struss 博士发明了mRNA差异显示技术，即DDRT—PCR(differ—ential display of mRNA by PCR)。 1994年，Erric Haay等将这种方法正式命名为差异显示反转录聚合酶链式反应(mRNA Differential Display PCR)，简称DDRT—PCR mRNA差异显示技术的基本原理及实验步骤 1.1 mRNA差异显示技术的基本原理 首先，用3’端锚定引物(Anchor Primer)(dT) VN作为反转录引物反转录细胞总mRNA，合成第一链cDNA； 然后，在用放射性同位素标记的dNTP存在的情况下，用随机引物(Arbitrary Primer)和与反转录引物相同的锚定引用进行PCR，随机扩增cDNA片段； 将PCR产物在变性