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微生物实验培训 2012年2月22日 内容 一、微生物无菌操作技术； 二、微生物分离、培养、菌落计数 三、显微镜直接计数 四、微生物中常用的几种染色技术 一、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 培养基配制 消毒灭菌 土样稀释 平板划线 涂布平板 菌落计数 二、染色技术 芽孢染色、革兰氏染色 三、显微镜直接计数 一、培养基 六要素：碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子、水 根据实验需要选用、设计最适合微生物生长的培养基。 加富性的选择培养基（投其所好），固体培养基 1、选择培养基配方： 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 2、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方 （用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 20g 自来水 1000mL pH 7.4～7.6 3、步骤： 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用 NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签,注明何种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 二、消毒灭菌 消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。 灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方法。 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 高压蒸汽灭菌 1.构造： 　（1）锅体：一般以2KW电热管作内热源，直接浸 在锅内水中，通电后产生蒸汽。另附有支架，以承受内锅体。 （2）内锅：由铝楹嵌接而成，用于承放待灭物品。底附有活动的栅格板，以防回流冷凝水将物品弄湿。其边上还有一用于插排气管的槽。　　　　 （3）锅盖：上有木把手、安全阀、放气阀、压力表 （4）其它：橡皮垫圈、旋钮等 高压蒸汽灭菌法其步骤如下：1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2.接通电源，进行加热3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 过滤除菌法：