基因芯片法快速检测结核分枝杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性-内科学专业论文.docxVIP

本课题获863项目支持(2002AA222021) 本课题获863项目支持 (2002AA222021) 硕士学位论文 硕士学位论文 基因芯片法快速检测结核分枝杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性 基因芯片检测结核分枝杆菌对链霉素和 乙胺丁醇的耐药性 摘 要 20世纪80年代以来，结核病疫情在全球呈回升趋势，我国是全球22个结核病高负 担国家之一，结核病人数位居世界第二位。随着结核病防治工作中的一般性问题得以 解决，结核病的耐药问题显得日益突出，尤其是耐多药结核病。传统检测耐药敏感性 的方法是依赖结核分枝杆菌(MTB)的生长的绝对浓度法和比例法，方法较可靠但耗时 长，需要2—3个月才能得到药敏结果，往往会延误患者的治疗。建立一种快速、简便、 特异、敏感的药敏检测方法成为当务之急。随着对MTB耐药机制的深入研究及基因芯 片的迅速发展，利用基因芯片检测基因突变，从而判断MTB是否耐药具有上诉多种优 点，有望成为临床检测的重要手段。 目的：利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌(MTB)对链霉素(sM)和乙胺丁醇(EMB) 耐药性。 方法：根据MTB的rpsL、ITS、embB基因设计相应的引物和探针，在一定条件下利用 三对引物对上述三个基因进行PCR扩增，其扩增产物与基因芯片上的寡核萤酸探针在 一定条件下进行杂交、显色。根据显色信号判断是否发生突变，从而判断MTB对药物 的敏感性。应用基因芯片法测定160株MTB临床分离株的SM和EMB耐药性，并与 BACTEC—MGIT-960TB检测系统结果进行比较，分别对结果相符与不相符的菌株进行 测序。 结果：在一定引物浓度下，94℃变性，60。C退火，72℃延伸的条件下对MTB的rpsL、 FFS、embB基因同时进行PCR扩增，其扩增产物在40℃的条件下与基因芯片进行杂交， 得到清晰、特异的信号，根据信号的有无或强弱可以判断药敏结果。基因芯片法测定 160株MTB临床分离株，结果显示SM敏感111株、耐药49株，以rpsL43、88位aag 突变为agg为主；BACTEC—MGlT-960TB检测系统敏感100株、耐药60株。芯片检测 结果EMB敏感142株、耐药18株，耐EMB的MTB以embB 306位atg突变为gtg 为主；BACTEC—MGIT-960TB检测系统敏感130株、耐药30株。基因芯片法检测的敏 感性、特异性分别为80．0％、99％和60．O％、100％。两种测定方法结果不符的菌株中， 采用基因测序法测定，结果显示基因芯片法检测点突变具有高度的特异性。 硕十学位论文 硕十学位论文 基因芯片法快速检测结核分枝杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性 结论：基因芯片法检测MTB对SM与EMB耐药性方法具有快速、简单，特异性高， 准确性高，可作为MTB的SM与EMB耐药性快速筛选方法。 关键词： 分枝杆菌，结核；药敏试验；基因芯片；链霉素；乙胺丁醇 颂+学位论文 颂+学位论文 基田芯片法快速检测结核分枝杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性 The establishment of rapidly detecting彪tuberculosis res i stance to SU and E船by Gene Chip method ABSTRACT IN 1980s，tuberculosis returned in the world，China is of 22 high—burden countries where the number of TB is the second largest in the world．with the common problems of TB control resolved，the problem of drug-resistance show more and more important，especially MDR．The traditional detection methods of susceptibility of anti—tuberculosis drugs need more than 2-3 months to get the result of drug—susceptibility,because of its depending the growth of MTB，such absolute concentration method and proportion method．It usually delayed the treatment．To establish rapid，simply,special