微生物检验第十二讲真菌.pptVIP

(一)白假丝酵母菌 条件致病： 皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎 内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾炎 中枢神经感染：脑膜（脑）炎、脑脓肿 圆形或卵圆形，直径3-6μm。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。 Microbiology Characteristics 将标本接种在沙氏培养基上，25℃或37℃ 培养1～４d后，可出现奶油色类酵母型菌 落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。 1)直接显微镜检查：取脓汁、痰和局部炎症性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检，显微镜见到革兰阳性(着色不均匀)、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝，可确认为假丝酵母菌感染。 2)抗原检测：取病人血清作ELISA、免疫印迹法等检测白假丝酵母菌抗原。 3)核酸检测：用PCR法将白假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。 Microbiology Examination 将标本接种在沙氏培养基上，25℃或37℃ 培养1～４d后，可出现奶油色类酵母型菌 落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。 鉴定 1)芽管形成试验：将假丝酵母菌接种于0.2～0.5m|血清中，37℃孵育1.5～４h观察有无芽管形成。白假丝酵母菌可形成芽管，其他假丝酵母菌不形成芽管。 将假丝酵母菌接种于玉米粉培养基25℃孵育1-2d后，白假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孢子。 2)厚膜孢子形成试验： 3)糖同化或发酵试验 商品化的产色培养基可快速鉴定白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。 (4)药物敏感试验：对二性霉素B、5-FC等药物敏感，但对5-FC极易产生耐药性。 (5)抗体检测：可用ELlSA夹心法、免疫酶斑点试验，方法简便。也可用乳胶凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清中抗白假丝酵母菌抗体。 (6)动物试验：将假丝酵母菌悬液注射1ml于家兔耳静脉或注射0.2ml于小白鼠尾静脉，观察5-7天，有无脏器小脓肿。 (二)热带假丝酵母菌 广泛分布于自然界，在人体表和外界相通的腔道中也存在。热带假丝酵母菌可引起皮肤、粘膜和内脏假丝酵母菌病。它除可在粘膜细胞上增殖引起感染外，其产生的毒素可引起过敏反应及产生的水解酶类引起组织损伤。 微生物检验 (1)直接显微镜检查：将标本作涂片革兰染色后镜检，观察Ｇ+假丝酵母菌。 (2)分离培养与鉴定：将标本接种在沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落,取菌落作TZC反应。 TZC反应 即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入0．05g／L氯化 三苯基四氮唑(TZC)，热带假丝酵母菌在此培 养基上生长后使培养基变为深红色或紫色， 而白假丝酵母菌不使培养基变色(淡红)。 案例分析 主诉：患白血病女童，10岁，发热2天。病史：病儿既往健康，1年前被诊断为白血病，经化疗后有缓解。入院前1个月开始出现进行性疲乏，体重减轻，骨髓象呈现50%未成熟细胞。曾给予化疗，并使用甾醇类药物，2天前体温升至39℃，无特异性定位体征。查体：T39℃，BP100/60mmHg，P100次/分，R20次/分，病人消瘦，呈慢性病面容。皮肤：苍白，有几处瘀斑，未见瘀点及黄疸；肺部：无异常。实验室检查：血：红细胞压积20%，WBC：600；分类：杆状核30%，淋巴细胞55%，单核细胞5%。尿无异常。病程记录：病人静脉注射替卡西林(ticarcillin)、奈夫西林(nafcillin)和妥布霉素(tobramycin)。入院后2天仍持续发热，第3天病人自诉左眼痛，视力模糊，眼底检查，在黄斑周边区域有白色、絮状病变。自诉喉痛，检查发现咽后壁有几处白色、粘附的斑块。 问题：1.你将采集何种标本做培养?2.根据上述结果，最有可能是哪一类的病原体? 3.第四天血培养有卵圆形、无荚膜、革兰阳性病原体生长，体积是葡萄球菌的2~3倍，某些细胞有出芽。 4.你如何鉴别该病原体的不同种类? 5.该病原菌的自然定居部位是什么? 第二节 隐 球 菌 属 广泛分布于自然界，也存在于人体表、口腔和肠道中，鸽粪中大量存在。人因吸入鸽粪污染的空气而感染，特别是免疫功能低下者主要引起肺脑的急性或亚急性或慢性感染 形态：圆形，有肥厚荚膜，出芽繁殖，不形成假菌丝 染色：墨汁负染 培养特性：沙保或血琼脂培养基，25℃和37℃酵母型，表面黏稠、浑浊，乳白色菌落 生化特性：分解尿素 荚膜多糖抗原：A～D4个血清型，我国约70%属A型 Microbiology Characteristics 新生隐球菌（墨汁负染色） 新生隐球菌菌落 微生物检验 1、标本直接镜检（1）脑脊液作墨汁负染色 (2)抗原检测 (3)核酸检测 2、分离培养 病原性隐球菌在25℃和37℃生长，而非病原性隐球菌在37℃时不生长。培养2—5d后观察菌落形态