基因敲除细胞及转基因小鼠技术突变检测系统研究-遗传学专业论文.docxVIP

《革圳触除细胞及转摹闽小鼠技术突变检测系统研究》 《革圳触除细胞及转摹闽小鼠技术突变检测系统研究》 姚真真99级博J。沧《 缩写 词表 DMlEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium DMSO Dimethyl Sulphoxide EDTA Ethlene Diamine Tetracetic Acid G418 Geneticin GANC Gancyclovir Hyg Hygromycin MGMT OCmethylguanine—DNA methyltransferase M_NNG N—methyl-N-nitro—N—nitrosoguanidine Neo Neomycin Resistant Gene OD Optical density PCR Polymerase Chain Reaction SDS Sodium Dodecyl Sulfate HSV—tk Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase Gene 《牲l硝融除细胞及转基因小鼠技术灾7竖捡删系统研究》、mt文摘要 《牲l硝融除细胞及转基因小鼠技术灾7竖捡删系统研究》 、mt文摘要 转基因动物突变研究模型的建畸：使I)NA损伤的诱发和修复、突变和癌变的研 究得以在一个整体动物内进行，也提供了一个快速检测组织特异性突变的有效的 ， 四维系统。(目前注册商标为Bi gBluc”、Mut,a“Mouse和Xonomouse的小鼠已进 ～ 入商业渠道。在前两种小鼠中由于是根据九噬菌体体外包装原理来进行的，住载 体回收时受到体外包装分子大小的限制，而Xenomouse小鼠品系虽克服了j：述缺 陷，但它是以较长的Lac z基因(3，087 bp)作为突变靶基冈，因此测序工作最 较大，而且在突变子的蓝白班筛选中也易产生误差‘”3。”】厂。可。 本课题组长期致力于转基因动物体内突变检测系统的研究。本研究报道’广能 同时检测体内表达基因和沉默基因突变状况的基丁^质粒pMcI，一c J／neo的转基闪 小鼠品系。该质粒因含有两个Lac I突变靶基因，其中一个表达，另 个4i表 达，而有别于国内外已建立的突变检测系统，能更全面地反映体内的生理状况。 该系统可应用于对化学物质的遗传毒性的体内监测、肿瘤发牛发展的分子机制的 ， 探讨、药物的安全性评价等研究。俱有较广泛的应用前景”“”’ 。 ＼ 由于pMCLacl／neo转基因小鼠含有两种不同状态的Lacl靶基因．有别于以 往所建立的只含有一种靶基因的系统。因此，建立。一种能快速、有效地分析这两 、’1一 种靶基因的检测方法，成为该转基凶小鼠建立后的义新课题．，通过适当力法将 ， pMCLacl／neo中两种Lacl靶基[月分开后，采用r新近建寺的M9／L l【：向选择系统 进行检测，并用已知的Lacl基因突变r作为阳性刑‘照，验证该策略的n』j J性。 +典验结果提示，M9／L正向选择系统町应j1]f pMCLacl／neo转基因小鼠r1，两种 LacI靶基因的检测：实验中所建立的突变榆测方法快速、有效。 在前期建立的基于pMCLac】／neo载体的转基因小鼠品系，我们义展开J，MNN(； ， 对该转基因小鼠的不同组织细胞内的ImcI靶基因的诱变率和诱变谱研究。／结果 ＼ 提示从突变发生的区域来看，在25个突变『二中，13个发生在靠近羧基端至LacO 基因区域，是突变发生的热点。同时有7个突变f发生在Lacl基因的编码Ix．的 氨基端区域中，也是突变发生的热点。从突变发生的靶基因的表达情况来看，24％ (6125)的突变发生在表达的靶基因区域，76％(19／25)的突变发生在沉默状态 的靶基幽区域从突变发7t-的位点来霸，人部分的突变都发，4二仡CpG岛，这冉次 ^j,t㈨№除细胞及转基因小鼠提水突，竖检测系统研究》 ^j,t㈨№除细胞及转基因小鼠提水突，竖检测系统研究》 姚翅真99级博士论文 表明在真核乍物蟾闪组DNA内CpG岛足突变的主要发生f≯点。厂～， 由f本形f究率先在突变检测系统中应用了具有叔功能的pMCLacI／neo穿 梭载体，在利用转基闪动物技术建立突变检测系统及展开相关{i}f究的同时，我们 又利用基因敲除技术，定向敲除DNA损伤修复酶基因一MGMT，建立，～系列 MGMT基I大】定向敲除的突变检测系统，及高表达MGMT的突变检测系统，并』茛 开了相应的DNA损伤修复的研究。 甲基鸟嘌呤一DNA甲基转移酶(06一methylguanine—DNA 一甲基胸腺嘧啶)的去除，因此一步反应就修复了突变基因的损伤 黧因 methyltfansferase，MGMT)能促进甲基从甲基化的DNA(06一甲基 04 岛、■，岁 打靶