《聚丙烯酰胺凝胶电泳》-毕业设计（论文）.docVIP

聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、目的 1、掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳技术； 2、掌握同工酶遗传标记的分析方法。 二、原理 电泳： 带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。1937 年 HYPERLINK /view/14445.htm \t _blank 瑞典学者 A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了 HYPERLINK /view/1421664.htm \t _blank 移动界面电泳仪 ，分离了马血清白蛋白的3种球蛋白，创建了电泳技术。大分子的蛋白质，多肽，病毒粒子，甚至细胞或小分子的 HYPERLINK /view/15155.htm 氨基酸,核苷等在电场中都可作定向泳动.1937年Tiselius HYPERLINK /view/2892372.htm 电泳仪进行血清蛋白电泳，它是在一U型管的自由溶液中进行的，电泳后用 HYPERLINK /view/3842435.htm 光学系统使各种蛋白所形成折光率差别成为 HYPERLINK /view/400.htm 曲线图象，将血清蛋白分为白蛋白,α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白和γ-球蛋白五种，随后，Wielamd 和Kanig 等于1948年采用滤纸条做载体，成功地进行了纸上电泳。从那时起，电泳技术逐渐被人们所接受并予以重视，继而发展以滤纸，各种纤维素粉， HYPERLINK /view/42594.htm 淀粉凝胶，琼脂和琼脂糖凝胶，醋酸纤维素 HYPERLINK /view/757628.htm 薄膜,聚丙烯酰胺凝胶等为载体，结合增染试剂如银氨染色， HYPERLINK /view/1362725.htm 考马斯亮蓝等大大提高和促进生物样品着色与分辨能力，此外电泳分离和免疫反应相结合，使分辨率不断朝着微量和超微量(1ng～0.001ng)水平发展，从而使电泳技术获得迅速推广和应用。 电泳是 HYPERLINK /view/1466754.htm 电泳涂料在阴阳两极，施加于电压作用下，带电荷的涂料离子移动到阴极，并与阴极 HYPERLINK /view/627227.htm 表面所产生的 HYPERLINK /view/1337053.htm 碱性物质作用形成不溶解物，沉积于 HYPERLINK /view/3841685.htm 工件表面。阳极电泳用水溶性树脂是一种高酸值的羧酸盐，在水中溶解后以分子和离子平衡状态存在于直流电场中，通电后，由于两极的电位差，离子定向移动，阴离子沉积在阳极表面，而阳离子在阴极表面获得电子还原成胺，它是一个电化学反应，包括电泳、电解、电沉积和电渗四个同时进行的过程。 1.电泳：在直流电压作用下，分散在介质中的带电胶体粒子在电场作用下向与其所带电荷相反的电极方面移动，叫电泳。 2.电沉积：阴离子树脂放出电子沉积在阳极表面，形成不溶水的漆膜，此过程叫电沉积。 3.电渗：电泳逆过程，当阴离子树脂在阳极上，吸附在阳极上的介质在内渗力的作用下，从阳极穿过沉积的漆膜进入漆液，称电渗。 4.电解：电流通过漆液时水便发生电解阴极放出氢气，阳极放出氧气，此过程即为电解。 电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r为质点半径，η为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即QE＝6πrην 可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素也影响质点的电泳迁移率。 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。 目前知道的电泳类型有：纸电泳、纤维素或淀粉粉末电泳、淀粉凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、线丝电泳等。在形式上更是多种多样，有在溶液中进行的，有将支持物做成薄膜或薄层的，也有做成平板的或柱状的。由于与光学系统和自动分部收集器相结合，有组成了等点聚焦仪，等速电泳仪等。 任何一种物质的质点由于其本身在溶液中的解离度或由于其表面对其他带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。例如，氨基酸、蛋白质、酶、激素、核酸及其衍生物等物质都具有许多可解离的酸性和碱性基因，它们在溶液中会解离而带电。一般说来，在碱性溶液中（即溶液的ｐH值大于等电点ｐI），分子带负