ITC实验设计与方法.PDF

ITC实验设计与方法 课程内容 1. KD ，C-value与反应物浓度的选择 2. 样品制备与缓冲液匹配 (buffer matching) 3. 样品池的清洗 4. 实验环境的要求 5. 实验参数的选择和优化 2 May 2012 ITC实验的流程 样品制备 实验优化 滴定实验 数据分析 KD ，C-value与反应物浓度的选择 4 May 2012 亲和力 ，KA或KD K =1/K and K =1/K , so… A D D A KA (M-1) KD (M) What they say… 100000 (1E5) 0.00001 (1E-5) 10 micromolar - 1000000 (1E6) 0.000001 (1E-6) 1 micromolar - (1E7) 0.0000001 (1E-7) 0.1 micromolar 100 nanomolar 100000000 (1E8) 0(1E-8) - 10 nanomolar 1000000000 (1E9) 0.000000001 (1E-9) - 1 nanomolar 亲和力增加, 相应的结合强度和选择性也增加 强结合 nM级的结合 ： 在非常稀释的情况下 也能发生结合 。 弱结合 mM级的结合 ： 在非常稀释的情况下 无法发生结合 。 弱结合 mM级的结合 ： 通过提高反应物浓度 促进结合的发生 。 KD意味着 ： • 高 KD = 弱结合 ，需要更高的配体浓度来饱 和结合位点 。 • 低KD = 强结合 ，只要较低的配体浓度就能 饱和结合位点 。 *KD对选择合适的反应物浓度至关重要 C-value 10 May 2012 C-value C-value = [样品池样品浓度]×n/KD 0