基因组芯片制备及其在筛选肿瘤相关基因中的应用研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

英文缩写词表英文缩写 英文缩写词表 英文缩写 英文全称 中文全称 Amp’ ampicillin resistant 氨苄青霉素抗性 ATP adenosine triphosphate 腺苷三磷酸 DD．PCR differential display PCR 差异显示PCR DEPC diethylpyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲亚砜 dNTP deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧三磷酸核苷 EB ethidium bromide 溴化乙锭 E．coli Escherichia coli 大肠杆菌 EDTA ethylene dinitrilotetra—acetic acid 乙二胺四乙酸 EP Eppendorf 离心管 GAPDH glyceraldehyde一3-phosphate 甘油醛．3．磷酸脱氢酶 dehydrogenase h hour 小时 IPTG isopropyl—B·D—thiogalactoside 异丙基．B-D一半乳糖苷 kb kilobase 千碱基对 LB Luria-Beitani LB培养基 M molar per liter 摩尔／升 mln minute 分钟 ml milliliter 毫升 oD optical density 光密度 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 pH power ofhydrogen pH值 l RDA RDA representational difference analysis 代表性差异分析法 RD--PCR restriction display PCR 限制性,显示PCR RFLP restriction fragment length限制性长度多态性分析 polymorphism RNase ribonuclease RNA酶 rpm revolutions per minute 每分钟转数 sec second 秒 SDS sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 SSC saline sodium citrate 柠檬酸钠盐溶液 SSH subtractive suppressive hybridization 抑制性消减杂交 Tris N．tris(hydroxymethl)aminometlume N-三羟甲基氨基甲烷 U unit 单位 UPW ultra pure water 超纯水 “g microgram 微克 LLl mieroliter 微升 X-gal 5-bromo-4-chloro．3．indolyl 5-溴-4·氯一3一吲哚·15一硫代 ．15．D．galactoside 半乳糖苷 摘 摘 要 恶性肿瘤，是严重威胁人类健康的一种高危常见病。肿瘤的发生发 展是一个复杂的多阶段过程，不仅涉及到多种肿瘤相关基因的表达失常， 而且涉及基因组的重排。寻找新的肿瘤相关基因是目前全世界生命科学 研究中的一个热点和难点。传统的方法基本是分别对单个基因进行研究， 然而在生理和病理状态下，每一个基因都不是单独起作用的。因此，要 揭示肿瘤在基因水平的本质，更有必要从基因组整体来研究。20世纪90 年代诞生的DNA芯片技术，使得这种必要成为可能。 本研究以K562细胞和人外周血白细胞(WBC)为材料，利用限制 性显示和分子克隆技术，分别构建了K562细胞和健康人WBC基因组 DNA片段文库。并用PCR技术分别扩增出400多个基因组DNA片段， 以纯化的PCR产物做探针，制各了K562细胞和健康人白细胞基因组 DNA芯片。然后，分别抽提K562细胞和正常入WBC基因组DNA，用 Sau3AI酶切，并将酶切产物加上人工接头，用限制性标记技术，标记上 荧光标记物Cy3，将标记好的K562细胞基因组片段和WBC基因组片段 分别与制备的基因组芯片杂交。芯片杂交结果经扫描分析发现K562细 胞肿瘤特异性基因42个，·正常人wBC特异性基因16个。进一步序列 分析证实，在K562肿瘤细胞特异性基因中有一个为BCR(breakpoint cluster gene)基因。另外还有部分转录调节相关基因。 研究结果表明，我们自制的K562细胞基因组和正常人WBC基因组 DNA芯片，可以成功地直接应用于筛选肿瘤相关基因，为基因组水平研 究肿瘤发生的分子机制提供了新的技术手段，为研究基因功能和寻找新 的肿瘤相关基因提供了新的思路。 关键词：1(,562细胞白细胞DNA芯片差异基因 AbstractCancer Abstra