微生物检验第十讲g需氧杆菌.pptVIP

三、微生物学检验 2、标本直接检查，初步报告 3、分离培养 4、鉴定 5、毒力试验 思考题 1、炭疽芽胞杆菌的致病物质有哪些？常用的鉴定试验有哪些？ 2、如何确定蜡样芽胞杆菌杆菌引起的食物中毒？ 3、引起食物中毒的细菌有哪些？ 4、如何从涂片中识别白喉棒状杆菌？ 5、对一名疑为白喉的患者，实验室应该进行怎样的检查？ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae 致病物质 (一)白喉外毒素 毒力强，130ng/kg可使人死亡 抗原性强 编码外毒素的tox基因——β-棒状杆菌噬菌体 一、临床意义 作用机制： A亚单位可使细胞延伸因子-2（EF-2）灭活，影响蛋白质的合成 作用特点： 毒性作用大，1分子能杀一个细胞 作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有毒素受体 肿瘤细胞对此毒素敏感 （二）索状因子 细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化 （三）K抗原 --细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 --抗吞噬 --有利于细菌在黏膜表面的定植 所致疾病：白喉--急性呼吸道传染病 传染源：患者及带菌者 传播途径：飞沫或污染 临床表现 细菌------上呼吸道粘膜， 生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症： 炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→窒息 毒素→→血液→→全身中毒症状 外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困难 声带麻痹---声音嘶哑 软颌麻痹---吞咽困难 心肌---心肌炎 白喉假膜 抗毒素免疫 感染后机体可获得牢固的免疫力 机体还可通过其它方式获得免疫力： 六月以下婴儿---------母亲 成人---------------------隐性感染、人工主动免疫 易感者： 1~5岁儿童 成人---也有可能 免疫性： 二、生物学特性 形态与染色: G +细长微弯的杆菌 一端或两端膨大呈棒状 常排列呈V、L、X等文字形 异染颗粒——形态上的鉴别特征 无荚膜、无芽胞、无鞭毛 白喉棒状杆菌异染颗粒 1000× 培养特性： 需氧或兼性厌氧，最适温度35～37℃ 营养要求高，在含血液、血清、鸡蛋的培养基上生 长良好 吕氏（Loeffler)血清斜面或鸡蛋斜面： 生长最快，6h即生长，10～12h长出灰白色、 湿润、有光泽的光滑型菌苔/菌落，菌体形 态典型、异染颗粒明显，连续传代可保持形 态和产毒性能不变 BAP中菌落 BAP： 菌落灰白色、光滑型、 直径1～2mm、有狭窄 β溶血环（轻型） 多次传代后菌体变为球 型 亚碲酸钾BAP：选择鉴别培养基 黑色菌落——鉴别依据 不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色 菌落 根据菌落特征及生化反应特点可将本菌分为： 重型、中间型、轻型 白喉棒状杆菌 在亚碲酸钾BAP中菌落 液体培养基： 生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同 生化反应： 分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚 （-）、硝酸盐还原（+）、触酶（+）、氧化酶（-）、明胶液化（-）尿素（-） 重型能分解淀粉、糖原、糊精，迟缓分解蔗糖 抵抗力： 对干燥、寒冷和日光抵抗力较其他无芽胞细菌强，在干燥的假膜中可生存3个月 对青霉素、红霉素等敏感，对磺胺不敏感 三、微生物学检验 分离出白喉杆菌，并证明其毒力 1、 标本采集： 分泌物 取双份 如不能及时检验，标本浸于无菌生理盐水或15%甘油生理盐水保存 直接涂片染色镜检： -- 2～3张涂片→G染色、异染颗粒染色 镜检——初报“直接涂片检出形似白喉杆菌”——早期诊断 --用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本，37℃10h，涂片染色镜检——提高阳性率 分离培养： 吕氏血清斜面： 37℃、8～12h →→涂片染色镜检 --检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断 亚碲酸钾BAP： 37℃、24～48h，黑色菌落 BAP： 轻型有β溶血环，应注意与溶血性链球菌鉴别 鉴定： 形态染色、菌落特点、生化反应 糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原 —鉴别棒状杆菌属不同的种 白喉：葡萄糖 （+）、麦芽糖 （+） 蔗糖 （-） 毒力试验（鉴定致病菌株的重要依据） 体外法： 琼脂平板毒力试验（Elek平板毒力测定） SPA协同凝集试验 对流电泳 琼脂平板毒力试验-Elek平板 对流免疫电泳