鱼中结晶紫的检测方案..ppt

前言 结晶紫属于三苯甲烷类染料，化学性质，暗绿色闪光粉末或粒子。溶于冷水和热水，呈紫色，极易溶于乙醇。于浓硫酸中呈红黄色，稀释后呈暗绿光黄色，然后转变成蓝和紫色，结晶紫这种化合物对鱼类的水霉病、寄生虫病等有很好的疗效，长期以来许多国家曾将其作为水产养殖业的杀菌剂。它们在鱼体内可分别代谢为和无色结晶紫，由于其母体化合物和代谢物均具有潜在的致癌、致畸、致突变等副作用，20世纪90年代 以来许多国家都将其列为水产养殖的禁用药物。但 是由于其抗菌效果好、价格便宜，不少业户仍在违规使用，因此结晶紫残留监控就显得格外重要。 仪器：Agilent1200 型高效液相色谱仪、均质机、 离心机、振荡器、旋转蒸发器、固相萃取装置、氮吹仪。 色谱条件：色谱柱，Eclipse-C18 250 mm×4.6 mm，粒度 5 μm；流动相，乙腈+乙酸铵缓冲液（pH 4.5）=80+20；流速 1.5 mL/min；柱温 35 ℃；激发 波长 265 nm, 发射波长 360 nm；进样量 20 μL 在临用前准确吸取一定量的混合标准中间溶 液，加入 0.4 mL 硼氢化钾溶液，用乙腈准确稀释至 2.0mL，配制适当浓度的混合标准工作液。在上述 色谱条件下，分别测定结晶紫混合标准工作溶液及样品提取溶液中的结晶紫， 外标法定量。 以 HPLC 测得的峰面积 y为纵坐标，相应的浓 度 x为横坐标绘制标准曲线，其线性关系和相关系数见表 1。结果表明，结晶紫在 1.0 ng/mL～500 ng/mL 范围内线性良好，可以满足定量分析的需要。 关系数表 1 线性回归方程、相、线性范围 鱼中结晶紫的检测方案 工分专122 张启阳、尹彬竹、向乾元、魏俊 实验材料与方法 试验结果 结果讨论 结晶紫的检测方案 1 2 3 样品的提取的保存 试剂和溶液 鲈鱼，从超市里购买鲈鱼活样品，取其肌肉，各自用均质机混均，每个样品各400 g，于-20 ℃冰箱保存备用。 样品与方法 结晶紫标准品： 纯度 93.9 %；结晶紫快速检测前处理试 剂盒，由中国检验检疫科学研究院北京陆桥商检新 技术公司生产。酸性氧化铝固相萃取柱（500 mg， 3 mL），PRS固相萃取柱（500 mg，3 mL），乙腈为 色谱纯，无水乙酸铵、冰乙酸、对-甲苯磺酸、乙酸 钠、硼氢化钾均为分析纯，实验用水为去离子水。 孔雀石绿乙腈 溶液; 结晶紫标准储备液：100 μg/mL结晶紫乙腈溶液; 、结晶紫混合标准中间溶液：10 μg/mL; 乙酸钠缓冲液：0.06 mol/L乙酸钠+0.005 mol/L 对甲苯磺酸，pH4.5; 乙酸铵缓冲溶液：0.125 mol/L，pH 4.5; 硼氢化钾溶液：0.07 mol/L，现配现用; 洗脱液：乙酸乙酯∶甲醇∶氨水体积比10∶9∶1 样品预处理 提取：准确称取 5.00 g已搅碎的样品于 50 mL 离心管中，加入结晶紫快速检测前处理 试剂盒中提取剂 1（20mL，由有机化学试剂组成的 混合液体试剂）和提取剂 2（由无机化学组成的混 合粉末试剂），8 000 r/min的速度均质 30 s，振荡 2 min，4 500 r/min 离心 5 min，取上清液 10.0 mL 于 鸡心瓶中，45 ℃水浴旋转蒸发至近干，用 2.5 mL 乙腈溶解残渣。 净化: 将 PRS 柱安装在固相萃取装置上，上端串联酸性氧化铝柱，用 5 mL 乙腈活化，转移提取液到柱上，再用 2.5 mL 乙腈洗涤瓶一次，过柱，重复操作一次，去掉酸性氧化铝柱，用 5 mL 乙腈清洗PRS柱，氮吹PRS柱至近干，在不抽真空清况下，加入 5 mL 洗脱液洗脱，收集全部洗脱液， 氮气吹至近干，加 0.4 mL 硼氢化钾溶液，还原，静置 20 min，用乙腈定溶至 1.0 mL，经聚四氟乙烯膜 过滤后上机分析 实验方法的选择 目前结晶紫检测方法主要有高效液相色谱法[1-3]和液质联用法[4-5]。我国 于2006年发布有关的水产行业标准（SN/T1768- 2006）[6]及国家标准（GB/T20361-2006）[7]。行业 标准SN/T1768-2006前处理简单，但是满足不了检 测限0.5 μg/kg的要求。其他方法的前处理均需多次萃取，多次离心，操作烦琐，前处理时间长，有机 溶剂用量大，实际检测工作中存在困难。本文综合各个方法标准中快速和灵敏的优点，建立了同时检测，结晶紫以及代谢物无色结晶紫总量的高效液相色谱法。 仪器与色谱条件 样品测定 准确度和精密度实验 以本底无结晶紫、 隐性结