高二生物基因工慢程的基本操作程序.pptVIP

三、目的基因导入受体细胞 1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 * 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 1.目的基因导入植物细胞 常用的方法: 农杆菌转化法、基因枪法、花粉 管通道法 农杆菌的特点: a.易感染双子叶植物和祼子植物。 b.具有趋化性。 c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上 1.目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法的导入过程: 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 ２.目的基因导入动物细胞 常用的方法: 显微注射技术 操作程序： a.先提纯含目的基因的表达载体 b.从动物体内取出卵(受精卵） c.显微注射仪进行显微注射 d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体 3.目的基因导入微生物细胞 原核生物的特点: 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。 大肠杆菌的转化过程: 用Ca2+处理细胞 增加细胞壁的透性，与细胞膜无关 → 感受态细胞 重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 1.目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 目的基因的检测内容和方法 检测方法: DNA分子杂交技术 DNA探针： 用放射性同位素等作标记的含有目的基因的DNA片段。 2.目的基因是否转录出mRNA 目的基因的检测内容和方法 检测方法: 分子杂交技术 用DNA探针与mRNA杂交。 目的基因的检测内容和方法 检测方法: 抗原—抗体杂交 3.目的基因是否翻译出蛋白质 4、个体生物学水平的鉴定 β—珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的β—珠蛋白，想一想，应该如何设计？ 思考与探究 思考与探究 1.从小鼠中克隆出β—珠蛋白基因的编码序列（CDNA）。 2.将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则表明β—珠蛋白基因已进入。 4.培养进入了β—珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β—珠蛋白。 *