高速逆力流色谱.pptVIP

* * 高速逆流色谱 一、概述 高速逆流色谱（High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC）是一种连续高效的液- 液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑 体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物 质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高 效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸附和回收 率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。 HSCCC技术最早是由美国国立卫生院Ito博士研 制应用，我国对HSCCC技术应用较早，HSCCC技 术发展十分迅速，在过去20~30年中，出现了 一系列新型的分离技术，积累了大量的科研成 果，自1995年以来，国外已有5本英文专著出 版，我国目前也有两本中文专著出版。 二、HSCCC色谱工作原理 HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离 柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记 录仪以及馏分收集器等部分。 选择溶剂体系 平衡 选择固定相 充满螺旋管柱 高速旋转螺旋管 泵入 流动相 流动相流出，注入待分离的样品 收集馏分 分 离 效 果 溶剂系统 固定相 流动相 洗脱方式、流动相的流速 仪器的旋转方向和转速 样品浓度和进样方式 柱温等 检测器 紫外-可见光检测器 蒸发光散射检测器 质谱检测器等 /v/b1585286663.html /v/b1585286663.html 与其它色谱分离技术相比，高速逆流色谱具有如下特点： 分离效率高 制备量大 操作灵活 回收率高 应用范围广 分离成本低 三、溶剂体系的要求 1 溶剂体系的种类 弱极性溶剂体系 中等极性溶剂体系 强极性溶剂体系 两相由正己烷和水组成，可用甲醇、乙醇、醋酸 乙酯等来调节溶剂系统的极性。 典型的溶剂体系有： 正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 中等极性溶剂体系的两相由氯仿和水组成，可以加入 甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。 适合于黄酮类、蒽醌类、香豆素和一些极性较大的木 脂素和萜类的分离。 典型的溶剂体系是氯仿-甲醇-水（4：3：2） 强极性溶剂体系的两相基本物质是正丁醇和水，可以 加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等溶剂来调节溶剂系统的 极性，也可以在氯仿水体系中调节pH值来增大极性,或 在异丁基甲醚水体系中加入适量的酸和碱.适合于极性 很强的生物碱类化合物的分离。 典型的溶剂体系: 氯仿-甲醇-HCl 异丁基甲醚-水（有机相加三乙胺，水相加盐酸） 2 溶剂体系选择的步骤 （1）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系； （2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用 TLC进行检验，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节 溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为 0.5~2为止； （3）用HPLC测定K值； （4）用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆 流色谱进行分离。 （1）溶剂不造成样品的分解或变性； （2）样品在溶剂中有足够高的溶解度； （3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数 值； （固定相为管柱总体积的50%以上，分配系 数为0.5~2） （4）固定相能实现足够高的保留。 3 选择溶剂时应注意 生物碱 氯仿-甲醇-NaH2PO4溶液(pH = 4)溶剂体系 氯仿-甲醇-盐酸体系 异丁基甲醚-四氢呋喃-水体系 异丁基甲醚-水体系 正己烷-乙醇-水体系 正己烷-醋酸乙酯-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 4 不同物质的溶剂体系 黄 酮 类 化 合 物 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 正丁醇-醋酸乙酯-水 氯仿-甲醇-水 正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水 萜类 异辛烷-乙酸乙酯-甲醇-水 异辛烷-甲醇-水 氯仿-甲醇-水 木脂素和香豆素 氯仿-甲醇-水 正己烷-乙睛-醋酸乙酯-水 正己烷-甲醇-水 氯仿-甲醇-水 四、应用 溶剂系统 两相溶剂系统：正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水（6：3： 2：5），在分液漏斗中充分混合，临用前将其分开。 分离条件： 室温下，上相为固定相，下相为流动相，流速为 0.7ml/min； 洗脱方式：由首端向尾端洗脱； 主机：正转，流速为800r/min 进样:3.8mg/2ml； 检测：紫外检测器，波长为220nm *