实验八dna的限制性内切酶知酶切和鉴定.pptVIP

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2019-01-12 发布于福建
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实验八dna的限制性内切酶知酶切和鉴定

* * 实验八 DNA的限制性内切酶酶切和鉴定一、实验目的掌握限制性内切酶的特性。了解限制性内切酶的用途。二、DNA限制性内切酶概述和分析　限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列; 另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础。绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至8个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列。 GAATTC CTTAAG EcoRⅠ AAGCTT TTCGAA HindⅢ 5′ 5′ 5′ 5′ 质粒pUC18的物理图谱三、材料重组质粒；EcoRI酶及其酶切缓冲液: 购买成品； HindⅢ酶及其酶切缓冲液: 购买成品;琼脂糖(Agarose) 。四、仪器移液器及吸头，水平式电泳装置,电泳仪,台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪, 微波炉或电炉,紫外透射仪。　　五、试剂 1、 5×TBE电泳缓冲液：配方见第一章。　　2、 6×电泳载样缓冲液：0.25％溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于 4℃。　　3、溴化乙锭(EB)溶液 *