醛缩酶A可与人蛋白激酶CK2′亚基发生特异相互作用.PDFVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2004 年 10 月 CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 20 (5) :623～629 α 醛缩酶 A 可与人蛋白激酶 CK2 ′亚基发生特异相互作用 黄功华 , 　梁景耀 , 　陈 　碧 , 　刘新光 , 　梁念慈 (广东医学院生物化学与分子生物学研究所 ,湛江　524023) α 摘要 　通过 PCR 扩增构建的重组质粒 pTHCKA′获得人蛋白激酶CK2 ′亚基编码区cDNA ,将 Pst ⅠNde Ⅰ双酶切的PCR 产物 ,连接到同样酶切的“诱饵”载体 p GBKT7 ,构建为酵母双杂交穿梭表达 ( ) 质粒 BD 质粒 ,经 DNA 测序确证及转染感受态酵母菌 AH109 以排除自主激活. 从体外培养的 HL ( ) 60 细胞中提取总 RNA ,采用 CLONTECH SMART switching mechanism at 5′end of RNA transcript 技术 , 在酵母细胞中构建 HL60 细胞的酵母双杂交 cDNA 文库 ,将构建的 BD 质粒、文库 cDNA 、酵母穿梭 表达质粒 p GADT7Rec , 共转染感受态酵母菌 AH109 进行酵母双杂交实验. 筛选与人蛋白激酶 α α CK2 ′相互作用蛋白. 筛选结果及一对一回复性实验显示 ,有 6 种与 CK2 ′相互作用蛋白,核酸序列 ( ) 分析及同源性检索表明 ,其中 1 种与醛缩酶 A 有高度同源性 996 % . α 关键词 　醛缩酶 A ,人蛋白激酶 CK2 ′亚基,酵母双杂交系统 ,相互作用蛋白 中图分类号 　Q55 α Aldolase A Interacts With Protein Kinase CK2 ′Subunit HUANG Gonghua , LIANGJingyao , CHEN Bi ,LIU Xinguang , LIANG Nianci ( Institute of Biochemistry and Molecular Biology , Guangdong Medical