实验六来体外抑菌实验.pptVIP

动物机能学实验2 编者：陈小军 实验内容 实验一 影响药物作用的因素 实验二 药物代谢动力学实验 实验三 处方与药物的配伍禁忌 实验四 中毒与解救试验 实验五 药物对离体肠的影响 实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验 实验七 生物碱的提取及其药敏实验 实验八 药物对离体心脏的影响 实验六、抗菌药物的体外抑菌实验 【实验目的】  掌握药敏试验的方法，了解药物对常见菌的作用。 意义： 体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。 鉴定新药是否具有抗菌活性。 【基本原理】 抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的能力。 两种测定方法：体外与体内（化学治疗实验）； 评价指标： （1）最低抑菌浓度（MIC）：　 　　 能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。 （2）最低杀菌浓度（MBC）： 　　 能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。 【试剂与器材】  细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。 256μ/ml青霉素溶液： 药敏试纸的准备： 【实验步骤】 一、纸片法  以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每ml约含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多，以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大肠杆菌平板备用。  二、纸片法  取已经制备好的4种药敏片：青霉素16万u/ml 、链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。  将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌效力。样例如下图： 二、试管二倍稀释法  取灭菌小试管10支，按照1至10编号，排列于试管架上。按照无菌操作，从第一管到第10管，分别加入牛肉膏汤1ml。用吸管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管，依次逐管进行稀释到第８管，第10管不加青霉素液，作细菌对照组，第９管只加药物，不加菌液，作为药物对照组。 1-8，10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至5×107～108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37℃培养箱内培养24h后，取出观察细菌生长情况。 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度（MIC）。 最低杀菌浓度（MBC） 结果记录于下表： 【注意事项】 1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉签火焰烧灼后丢弃。 2. 用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意 稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。 3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈 出现交叉。 4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上做好记号。结果记录时将本组结果综合。 【思考题】 分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较常见药物对金黄色葡萄球菌的作用强度。 Careful ,then successful ! * 下一张 主 页 退 出 上一张 耐 药 性 抗 菌 作 用 防治作用与不良反应 药 动 学 过 程 抗 病 力 致 病 力 【实验原理】 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 ? ? ? ? 大肠杆菌 链球菌 金葡菌 四环素 (25 %) 磺氨嘧啶钠(1% ) 链霉素 （1.0万u/ml） 青霉素 （16万u/ml） 细菌 实验结果记录：抑菌直径（mm） 下一张 主 页 退 出 上一张 药物 沙门氏杆菌 下一张 主 页 退 出 上一张 0.5 0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 葡萄球菌液（ml） 0 弃1 1 1 1 1 1 1 1 1 青霉素（ml） 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 牛肉膏汤（ml） 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 试管号 下一张 主 页