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* * 第二节 细菌的群体生长繁殖 微生物的特点： 个体微小 除真菌外，我们肉眼看到或接触到的微生物已不是单个，而是成千上万个单个的微生物组成的群体。 微生物接种是群体接种，接种后的生长是微生物群体繁殖生长。 对细菌群体生长规律的了解是对其进行研究与利用的基础 一、生长曲线 生长曲线(Growth Curve)： 细菌接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数为纵座标作图，得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线。 在微生物学中提到的“生长”，均指群体生长。 一、生长曲线 一条典型的生长曲线至少可以分为 迟缓期，对数期，稳定期和衰亡期等四个生长时期 细菌的生长曲线一般用菌数的对数为纵坐标作图 （参见P130） 采用活菌计数比较麻烦，必需严格操作，否则不易得到准 确的结果，重复性也差，在实际工作中多采用分光光度计 测定OD值的方法绘制细菌的生长曲线。 （参见P130） 迟缓期(Lag phase)： 将少量菌种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌数 不立即增加，或增加很少，生长速度接近于零。也称延 迟期、适应期。 （参见P130倒数第一段） 迟缓期的特点： 分裂迟缓、代谢活跃 细胞形态变大或增长，例如巨大芽孢杆菌，在迟缓期末，细胞的平均长度比刚接种时长6倍。一般来说处于迟缓期的细菌细胞体积最大； 细胞内RNA，尤其是rRNA含量增高，合成代谢活跃，核糖体、 酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶。 对外界不良条件反应敏感。 以上特征说明细胞处于活跃生长中，只是分裂迟缓。 在此阶段后期，少数细胞开始分裂，曲线略有上升。 迟缓期出现的原因： 微生物接种到一个新的环境，暂时缺乏足够的能 量和必需的生长因子（分解和催化有关底物的酶，或 是缺乏充足的中间代谢产物等），种子老化（即处于 非对数生长期）或未充分活化，接种时造成的损伤等。 调整代谢需要一段适应期 （P130倒数第一段） 调整代谢 迟缓期的长短与菌种的遗传性、菌龄以及移种前后 所处的环境条件等因素有关，短的只需要几分钟， 长的需数小时。 在生产实践中缩短迟缓期的常用手段： （P130倒数第一段） (1)通过遗传学方法改变种的遗传特性使迟缓期缩短； (2)利用对数生长期的细胞作为种子； (3)尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大； (4)适当扩大接种量 对数生长期(Log phase) or指数生长期(Exponential phase) ： 以最大的速率生长和分裂，细菌数量呈对数增加， 细菌内各成分按比例有规律地增加，表现为平衡生长。 细菌个体形态、化学组成和生理特性等均较一致，代谢旺盛、生长迅速、代时稳定； 是研究微生物基本代谢的良好材料； 常在生产上用作种子，使微生物发酵的迟缓期缩短，提高经济效益 在细菌个体生长里，每个细菌分裂繁殖一代所需的时间为代时(Generation time)，在群体生长里细菌数量增加一倍所需的时间称为倍增时间（Doublingtime)。 代时通常以G表示。 ——— t1 – t0 n G = 影响微生物增代时间（代时）的因素： 1）菌种，不同的微生物及微生物的不同菌株代时不同； 2）营养成分，在营养丰富的培养基中生长代时短 3）营养物浓度，在一定范围内，生长速率与营养物浓度 呈正比 凡是处于较低浓度范围内，可影响生长速率的营养物成分，就称为生长限制因子。 4）温度，在一定范围，生长速率与培养温度呈正相关。 又称恒定期或最高生长期，此时培养液中活细菌数最高并维持稳定。 稳定生长期(Stationary phase)： 营养物质消耗，代谢产物积累、pH变化→→→→逐步不适宜于细菌生长→→→生长速率降低直至零（即细菌分裂增加的数量等于细菌死亡数)。 生产上延长稳定期的方法： 补充营养物质（补料）或取走代谢产物、 调节pH、调节温度、 对好氧菌增加通气、搅拌或振荡 对数期到稳定期的转变是细胞重要的分化调节阶段： 1）开始储存糖原等内含物； 2）形成芽孢或建立自然感受态（芽孢杆菌）； 3）发酵过程积累代谢产物的重要阶段； 某些放线菌抗生素的大量形成也在此时期 获得更多的菌体物质或积累更多的代谢产物 稳定期的长短与菌种和外界环境条件有关 衰