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微生物遗传与育种 第 一 节微生物遗传的物质基础 一、遗传物质化学本质的确证 1、DNA（或RNA）是遗传信息的携带者 三个经典实验 细菌转化实验 噬菌体感染实验 病毒重建实验 细菌转化(transformation)试验 1928年，英国F. Griffith发现 研究对象 Streptococcus pneumoniae（肺炎链球菌） S型（光滑型）菌株：有致病性，菌落表面光滑，有荚膜 R型（粗糙型）菌株：无致病性，菌落表面粗糙，无荚膜 细菌培养实验 热死S菌―――→不生长 活R 菌―――→长出R菌 热死S菌+活R 菌――→长出大量R菌和10-6S菌 S型菌的无细胞抽提液试验 活R菌+ S菌无细胞抽提液――→长出大量R菌和少量S菌 1944年Avery等对热死S型菌中可能的转化因子在离体条件下进行了转化试验： 噬菌体感染试验 A. D. Hershey和M. Chase， 1952年 基础 DNA分子中只含磷不含硫，蛋白质分子中只含硫不含磷 以32PO43-和35SO42-作为磷源或硫源的组合培养基 培养后得到： 含32P-DNA或者含35S-蛋白质 病毒重建实验 H. Fraenkel-Conrat，1956 实验材料 烟草花叶病毒（TMV） 霍氏车前花叶病毒（HRV） 处理 在一定浓度的苯酚溶液中振荡，分离蛋白质外壳与RNA核心 2、DNA的结构 DNA的结构 基本单位是脱氧核苷酸 反向平行、右手螺旋 碱基A、T、C、G有序排列 碱基之间由氢键连接 3、DNA的复制 半保留复制 复制起点、复制方向、复制单位 DNA的半不连续复制 复制的几种主要方式 θ型复制 D环复制 线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。 4、生物染色体、病毒遗传物质 原核生物的染色体 核区，无核膜包裹，DNA裸露，不与蛋白形成复合体 染色体组成： DNA、 RNA、蛋白质 往往只有一条染色体，大多数以双链、共价闭合的环状形式存在 真核生物的染色体 核膜包裹，线性DNA与组蛋白结合形成染色体 染色体不止一个，每个染色体中含有1个线性DNA分子 细胞分裂中期呈棍棒状，静止期为颗粒状 染色体基本组成单位：核小体 两种生物染色体DNA复制区别 复制子大小、数量上差异 复制起点、复制速度、方向上差异 第 二 节微生物的基因和基因组Microbial Gene and Genome 一、基因概念和微生物的基因结构 概念 一段具有特定功能和结构的连续的DNA片断，是编码蛋白质或RNA分子遗传信息的基本遗传单位。 原核生物基因的结构 真核生物基因的结构 一般无操纵子结构 存在大量不编码序列和重复序列 转录和转译在细胞中有空间间隔 基因被许多无编码功能的内含子阻隔，使编码序列变成了不连续的外显子。 二、基因组 基因组（genome） 单倍体细胞中所含的全套遗传物质 大多数细菌和噬菌体基因组是指单个染色体上所含的全部基因 二倍体真核生物基因组是指单倍体细胞核内整套染色体所含的DNA分子及其所携带的全部基因 原核生物与真核生物基因组比较 第 三 节质粒和转座子Plasmid and Transposon 一、质粒概述 质粒（plasmid） 存在于各种微生物细胞中、独立于染色体外、能进行自主复制的遗传因子。 特点 可自我复制、稳定遗传；非必需；可转移；可整合；可重组；可消除 质粒的大小和复制 二、质粒的分子结构 SC构型 OC构型 L构型 质粒的分离和鉴定 分离的步骤 细胞培养 细胞裂解 蛋白质和RNA的去除 质粒DNA与染色体DNA的分离（关键步骤） 质粒的鉴定 电镜 琼脂糖凝胶电泳确定分子量 聚丙烯酰胺凝胶电泳 密度梯度离心 质粒的限制性酶切图谱 三、质粒的主要类型 据质粒所编码的功能和赋予宿主的表型效应分类 致育因子（Fertility factor，F因子） 抗性因子（Resistance factor，R因子） 产细菌素的质粒（Bacteriocin production plasmid） 毒性质粒（virulence plasmid） 代谢质粒（Metabolic plasmid） 隐秘质粒（cryptic plasmid） 四、转座子的类型和分子结构 转座因子（transposable element）的概念 可在DNA链上改变自身位置的一段DNA序列。 转座因子的共同特征 插入寄主DNA后，导致基因失活； 转座以后，原来的转座子依然保持在原位，而在靶序列上复制了一个转座子； 插入时在靶DNA位点产生一个短的正向重复序列。 根据转座机理不同分类 转座子 反转座子 原核生物中的转座因子类型 插入（IS）序列 转座子(Tn