猪α-干扰素与其刺激因子Mx2抗猪瘟病毒的初步分析.pdfVIP

猪Ⅱ．干扰素及其刺激因子Mx2抗猪瘟病毒的初步研究 3．6抗血清的应用……………………………………………………………………75 4讨论与小结……………………………………………………………………………76 4．1讨论…………………………………………………………………………………………………………76 4．2小结…………………………………………………………………………………………………………76 参考文献………………………………………………………………………………．．78 全文结论………………………………………………………………………………………。81 在读期间发表论文…………………………………………………………………………。83 致 谢…………………………………………………………………………………………………………………．85 万方数据 摘要 猪Q．干扰素及其刺激因子Mx2抗猪瘟病毒的 初步研究 摘要 Swine 猪瘟(Classical 高度接触性传染病。在临床上，由强毒引起、发病率乖死亡率均较高的称为急性猪瘟， 而弱毒感染引起的猪瘟由于不表现临诊症状则可能不易被察觉。猪瘟呈世界性分布， 一旦暴发，会对养猪业造成重大经济损失，所以WHO将其列入法定的A类传染病， 我国也将其列为一类动物疫病。 猪瘟病毒的基因组是单股正链线状RNA，全长大小约为12．3kb。其57端无甲基 化帽子结构，但有稳定的二级结构，还有多个不能启动翻译蛋白的隐形AUG密码子 存在，3’端没有poly(A)尾巴结构，在所有的瘟病毒属中，3’端的保守性很高，尤其 是最后大约100m的区域内。 cc．干扰素之所以能够发挥其抗病毒作用，是因为它能够与其在效应细胞膜上的受 体结合，内化后进入细胞，诱导效应细胞合成某些具有活性的蛋白质。I型干扰素是 细胞免疫抵御病毒病原体的第一道防线，其信号传导的结果就是干扰素刺激基因 (ISGs)被广泛上调，来靶向阻击病毒生命周期的不同阶段：入胞、复制、装配并口释 放。 染的关键调节因子。它们属于大GTP酶的动态蛋白超家族，这个家族与细胞内囊泡 的运输和细胞内环境的稳态有关。Mx蛋白具有广泛的抗RNA病毒的活性，其抗病毒 机理是病毒被抑制在其生命周期的早期阶段：进入宿主细胞后、基因组开始复制前这 一时期。 自从被发现有抗病毒作用后，Mx蛋白就开始被广泛研究，目前已成为抗病毒研 究的热点。到目前为止，研究者已经发现人MxB蛋白能抑制HIV-1的增殖、人MxA 等。本研究围绕着猪Mx2蛋白对CSFV的作用开展了以下试验： 1．干扰素值抗猪瘟病毒研究 本部分研究探讨了干扰素q对猪瘟病毒的抑制作用的浓度依赖性和时间依赖性。 万方数据 猪a．干扰素及其刺激因子Mx2抗猪瘟病毒的初步研究 着干扰素处理浓度的升高，抑制猪瘟病毒的效果越明显，相对于空白对照组的抑制率 受到干扰素Gt刺激后，细胞内Mx2的变化情况进行了探究。结果显示，刺激细胞的 干扰素0【浓度越高，Mx2上调变化越明显，并且其变化在24h之内呈现时间依赖性。 2．猪Mx2抗猪瘟病毒的初步研究 blot试验验证，两个重组质粒均能在细胞中正确表达，蛋白大小分别为48KDa和 102KDa，进一步激光共聚焦试验验证，两个重组质粒aS,亚N胞定位都是在细胞质中。 赖性，均在CSFV接种后的12．24h期间抑制作用逐渐增强。间接免疫荧光试验结果显 作用来实现的。 3．猪瘟病毒Core蛋白的原核表达、抗体制备及应用 兔化弱毒中扩增出完整的Core基因，经酶切和序列测定后，克隆到携带His标签的原 2(R2)中，利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明：经终浓度为 0．1mmol／L blot结果显 示Core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应，均出现单一 反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb／c小鼠，制备特异性抗血清，Westernblot结果 显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带。经激光共聚焦鉴