添加不同浓度的clc和ldl对猪卵点母细胞冷冻保存的影响-动物遗传育种与繁殖专业毕业论文.docx

学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而 使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了 明确的说明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名： 刘枸 日期：型』垒兰月至羔旦 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可 以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并 授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按 保密的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1．保密口，在 年解密后适用于本声明：2．不保密日。 么7 研究生签名：壅』超 导师签名：』蕴二． 曰期：j鱼≤生姐蓦垣 万方数据 摘要猪卵母细胞冻存技术处于不断优化的状态，由于其结构的独特性，冻融过程中渗透压等的 摘要 猪卵母细胞冻存技术处于不断优化的状态，由于其结构的独特性，冻融过程中渗透压等的 变化均会对卵母细胞膜及细胞器造成一定程度的损伤，为了检测CLC及LDL对冻融后猪卵母细 胞线粒体膜电位及zP泛素化水平的影响，本研究应用玻璃化冷冻及缓慢冷冻两种方法，分别 比较添加两种不同浓度的冷冻载体LDL及CLC后卵母细胞的线粒体膜电位差异，并分析玻璃化 冷冻后M II期卵母细胞的透明带泛素化程度。试验主要采用SDS—PAGE以及Western blot方法 对不同处理组的猪卵母细胞透明带蛋白样品进行分析，并用线粒体膜电位特异探针jc一1标记 各处理组线粒体膜电位，采用荧光显微镜观察红、绿荧光强度和分布情况，为寻找更好的卵母 细胞冻融方法并使之更好地应用于生产实践提供理论支持。试验得到以下结果： 1．玻璃化冷冻和缓慢冷冻方法冻融GV期卵母细胞后，LDL及CLC处理组存活率分别74．84％， 55．26％以及69．86％，44．53％，玻璃化冷冻猪MIf期卵母细胞解冻后添加不同浓度CLC处理组的 细胞存活率均高于LDL冷冻处理组；添加10％CLC冻融处理组的细胞存活率显著高于其他处理 组，与新鲜组无显著差异(P)O．05)： 2．冷冻保护剂中添加不同浓度的CLC和LDL(1％，10％，20％)处理组在冷冻解冻后培养，M II期卵母细胞透明带蛋白免疫印迹结果分别显示在63 k1)a，82 kDa，110 kDa处以及61 kDa， 80 kDa，106 kDa处发生不同程度的泛素化标记，且泛素化条带灰度值差异显著，表明猪卵母 细胞体外成熟培养过程中透明带蛋白均发生不同程度的泛素化； 3．线粒体膜电位特异探针jc-1标记各玻璃化冷冻处理组，10％CLC处理组的△、l，m均高于其 他冷冻处理组，与新鲜组相比无显著差异(PO．05)。 关键词： 猪卵母细胞；玻璃化冷冻；LDL；c【．C；线粒体膜电位 万方数据 AbstractOocytes Abstract Oocytes cryopreserved technology has been improved，due to the uniqueness of its structure，the change of osmotic pressure and m the process of freezhag and thawhag will the egg cell membranes and orgaaetles caused certain degree of damage，in order explore the toxicity of pig oocytes at different periods，tin order to detect the CLC and LDL of porcine oocytes mitochondria]membrane potential and after freezing and thawing ZP ubiquitin level influence，this study applies vitrification freezing and slow freezing，two methods were compared to add two kinds of different concentrations of oocytes after freezing carrier LDL and CLC mitochondrial membrane potential