基因组dna及gstp1基因甲基化修饰与燃煤污染型砷中毒关系探讨-卫生毒理学专业论文.docxVIP

贵 贵 阳 医 学 院 2011 届 硕 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 10 基因组 DNA 及 GSTP1 基因甲基化修饰与燃煤污染型砷中毒关系探讨 卫生毒理学， 研究生 杨婷婷，导师 张爱华教授 1 研究背景 中文摘要 砷是环境中普遍存在的一种类金属元素，是明确的人类致癌物。环境砷污染 可导致慢性砷中毒乃至癌症的发生, 其所造成的公众危害已成为全球严重的公共 卫生问题。慢性砷中毒对人体的危害极为严重,可导致皮肤癌、肺癌、肝癌、膀胱 癌等的高发，砷的中毒机制至今尚不明了。燃煤污染型地方性砷中毒(以下简称燃 煤型砷中毒)是一种因燃用高砷煤和长期摄取受高砷煤污染的食物而引起的一种 地方性砷中毒，严重威胁着群众健康，其致病、致癌机制一直是该领域的研究重 点。 近年来，表观遗传学(epigenetics)已成为生命科学中普遍关注的前沿学科。 环境化学致癌因素引起的 DNA 序列以外的表观遗传学调控机制逐渐引起了人们的 广泛关注，特别是 DNA 甲基化，它是肿瘤中最常见的分子改变形式之一，可导致 基因表达水平的变化，促进肿瘤形成。多种化学毒物可引起基因组低甲基化和特 定基因的高甲基化，即异常甲基化，其在疾病形成上起着重要的作用。砷中毒与 基因组 DNA 甲基化改变、特定基因甲基化改变是否有着密切联系呢？本研究在既 往基础上，选择谷胱甘肽 S-转移酶 P1（GSTP1）这一重要的解毒基因及全基因组 DNA 进行甲基化的表观遗传学研究。 谷胱甘肽 S-转移酶 P1（GSTP1）是一重要的解毒基因、DNA 损伤修复基因， 参与代谢、解毒和消除潜在的具有基因毒性的外来化合物，它能够代谢多种致癌 化合物，起到保护细胞、避免 DNA 损伤和癌细胞形成的作用，抑制 GSTP1 活性可 以导致 DNA 损伤的敏感性增强和癌变发生的机率增加。本研究对我省燃煤污染型 砷暴露病区人群的 DNA 甲基化（基因组 DNA 甲基化、GSTP1 基因甲基化）、mRNA 转录、蛋白表达三个水平探讨砷致病的 DNA 异常甲基化表观遗传机制，为砷中毒 及砷致癌表观遗传生物学标志的筛选和应用提供实验依据。 2 研究对象与方法 2.1 调查点及研究对象 贵州省兴仁县交乐乡燃煤污染型砷中毒病区，按地方性砷中 毒诊断标准 （WS/T211-2001），选择 123 例砷中毒患者（轻度 42 例、中度 41 例，重度 40 例）， 在距病区约 13 km 的非砷暴露村，选择 47 例居民作为对照组。在知情同意原则下， 采集被调查者的外周血进行 DNA 甲基化(基因组 DNA 甲基化及 GSTP1 基因甲基化) 及 mRNA 的检测。此外收集自愿接受手术治疗的 53 例砷中毒患者皮肤组织标本(一 般病变 28 例、癌前病变 20 例，癌变 5 例)和 15 例正常皮肤组织标本，检测 GSTP1 蛋白表达。 2.2 研究方法 2.2.1 砷中毒患者基因组 DNA 甲基化调控 采用高效液相色谱法检测砷中毒患者 外周血基因组 DNA 甲基化调控； 2.2.2 砷中毒患者 GSTP1 基因 DNA 甲基化调控 采用甲基化特异性 PCR 检测砷 中毒患者外周血 GSTP1 基因 DNA 甲基化调控； 2.2.3 砷中毒患者 GSTP1 基因 mRNA 转录 采用实时荧光定量 PCR 检测砷中毒患 者外周血 GSTP1 mRNA 转录水平； 2.2.4 砷中毒患者 GSTP1 蛋白表达 采用免疫组织化学法检测 GSTP1 蛋白在皮肤 组织中的表达。 3 结果 3.1 砷中毒患者基因组 DNA 甲基化较对照组人群降低，差异有统计学意义。 全基因组 DNA 甲基化水平砷中毒组人群（13.36±6.32）%较对照组人群（19.70 ±7.23）%降低，差异有统计学意义。中、重砷中毒组外周血基因组 DNA 甲基化水 平分别为（8.74±4.65%、13.72±5.73%），与对照（19.70±7.23）%比，差异有 统计学意义；轻度砷中毒组外周血基因组 DNA 甲基化水平（17.53±5.23%）与对 照组差异无统计学意义。 3.2 砷中毒患者 GSTP1 基因 DNA 高甲基化，与对照组人群存在差异 砷中毒患者按病情分组，轻、中、重度砷中毒组患者外周血 GSTP1 基因 DNA 甲基化阳性率分别为 28.57%、57.10%和 65.00%，与对照组（6.38%）比较差异有 统计学意义；按皮肤病理诊断分组，一般病变组（（包括色素增多、皮炎和角化过 度等）、癌前病变组（包括不典型增生、皮角及经久不愈溃疡）和癌变组（包括 Bowen’s 病、基底细胞癌和鳞状上皮细胞癌）患者 GSTP1 基因 DNA 甲基化阳性率 分别为 21.43%、50.00%和 80.00%，与对照组（6.6