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1105 非无菌产品微生物限度检查： 微生物计数法 四川省食品药品检验检测院 孙雪奇 2016年6月 北京 一、培养基适用性 二、方法适用性 三、样品检验 一、培养基适用性 1、菌种 2、培养基适用性检查 3、菌液制备 4、培养及可接受标准 1、菌种 胰酪大豆胨琼脂 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞、 白色念珠菌、黑曲菌 胰酪大豆胨液体 （MPN法） 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞 沙氏葡萄糖琼脂/其他选择性培养基 （如含抗生素的沙氏 葡萄糖琼脂玫瑰红钠琼脂） 白色念珠菌、黑曲菌 4 2、培养基适用性检查 名称 胰酪大豆胨琼脂 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色 试验用菌种 念珠菌、黑曲霉 接种方法 分别接种不大于100cfu试验用菌悬液于直径90mm的无菌 （变化不大） 平皿中，倾注约15m l该培养基，轻轻摇匀 适用性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假 单胞菌于30～35℃培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲 判断标准 霉，于30～35℃培养不超过5天。被检培养基菌落平均 数/对照培养基菌落平均数的比值，应在 0.5~2 ，且菌 落大小、形态一致。 2016-6-13 5 TSA培养基适用性试验流程 提前1天接种枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜 绿假单胞菌、白色念珠菌(黑曲霉使用孢子悬液) 稀释菌液至适宜浓度 准备待检培养基和对照培养基 接种菌液入平皿 加入培养基，混匀 置规定温度培养、计数 名称 沙氏葡萄糖琼脂 /选择性培养基 试验用菌 白色念珠菌、黑曲霉 种 接种大于100cfu试验用菌悬液于直径90mm的无菌平 接种方法 皿中,倾注约15m l该培养基，轻轻摇匀。 适用性检查：白色念珠菌、黑曲霉于20～25℃培养 不超过5天。被检培养基菌落平均数/对照培养基菌 判断标准 落平均数的比值应在 0.5~2 ，且菌落大小、形态一 致。 3、菌液制备 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌用胰酪 大豆胨琼脂或液体培养基，制成新鲜培养物，再以pH7.0无菌 氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成菌悬液 白色念珠菌用沙氏葡萄糖琼脂或液体培养基，制成新鲜培 养物，再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化 钠溶液制成菌悬液 黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，培 养5-7天，加入3～5m l含0.05%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用相同 稀释剂制成适宜浓度菌悬液 2016-6-13 8 4、培养及可接受标准 胰酪大豆胨琼脂 胰酪大豆胨肉汤 沙氏葡萄糖琼脂 培养温度 30～35℃ 30～35℃