第02章核酸的高结构与功能.ppt

第2章核酸的结构与功能 Structure and Function of Nucleic Acid 1868年 Fridrich Miescher 从脓细胞中提取核素。 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质。 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构。 1968年 Nirenberg发现遗传密码。 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶。 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA测序方法。 1985年 Mullis发明PCR技术。 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP)。 1994年 中国人类基因组计划启动。 2001年 美英等国完成人类基因组计划。 核酸的功能 DNA ：遗传信息的储存和携带 RNA ： 参与遗传信息的复制与表达 （病毒RNA也可作为遗传信息的载体） 一、DNA 的一级结构Primary Structure of DNA 定义 核酸分子中核苷酸的排列顺序及其连接方式。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 荣获1962年诺贝尔生理学和医学奖 课堂小结 RNA一般特点 功能：RNA与蛋白质共同负责基因的表达和表达过程的调控。 结构： 1.RNA是单链分子，嘌呤总数不一定等于嘧啶总数。 2.RNA可形成局部双螺旋，非螺旋处为单链突环，“发夹” 结构。 3.RNA双螺旋结构中，碱基配对不如DNA严格，除了GC配对，可有 GU（氢键较弱）配对。 4.tRNA存在稀有碱基，主要出现在突环部分。 RNA结构层次 (一) 一级结构 单股多核苷酸链中核糖核苷酸的排列顺序和 共价连接 (二) 二级结构：不同RNA二级结构差异明显 局部的双链结构 茎-环结构 发夹结构 (三) 三级结构 在二级结构形式基础上折叠形成的空间构象 * tRNA的一级结构特点 由70~120个核苷酸组成 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 第五节 核酸酶 Nuclease 本章小结 1.重要概念：DNA变性，解链温度（Tm），增色效应，复性，annealing，hybridization，ribozyme. 2.结构层次： 元素组成：C.H.O.N.P 基本单位：核苷酸（DNA及RNA组成的异同） 一级结构：3’5’磷酸二酯键，5’端到3’端，各种RNA 组成特点 二级结构：DNA双螺旋，tRNA三叶草 三级结构：DNA超螺旋，tRNA倒L型 3.重要性质：紫外吸收、DNA变性及分子杂交。 核酸的理化性质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第四节 一、核酸的一般理化性质 1. 酸碱性：两性解离，但酸性较强； 2. 高分子化合物性质： a. 粘度 ：DNARNA b. 超离心沉降 c. 沉淀行为：加盐（中和电荷），乙醇 d. 凝胶过滤 f. 分子量大小：分子量（D 道尔顿），碱基对数目(bp) 离心沉降常数（S） 核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。 二、核酸分子具有强烈的紫外吸收 碱基的紫外吸收光谱 DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 三、变性、复性和杂交 （一）变性 定义：在某些理化因素作用下，DNA 分子双链解开成两条单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 目 录 DNA变性的本质：是双链间氢键的断裂，碱基堆积力破坏 部分变性DNA的电镜图像 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 目