生物分离工程第命五章层析.pptVIP

层 析 主讲：杨丽芬 起源 1903年，俄国的植物学家茨维特（Tsweet）提出。1901年的时候开始研究色谱现象。1903年，他将植物叶子的石油醚提取液倒入到填装CaCO3的玻璃管内，用纯净的石油醚淋洗，产生了不同的色带，她们分别为胡萝卜素、叶黄素、和叶绿素A。所以称之为色谱法（层析）。 层析技术的特点 分离精度高、设备简单、操作方便，在物质成分的定量分析、检测、制备分离与纯化方面应用广泛，是下游技术加工过程中最重要的纯化技术之一。 层析的原理 据混合物中，溶质在互不相溶的两相之间分配行为的差别，引起移动速度的不同而进行分离的方法。 互不相溶的两相分别称为固定相和流动相，固定相填充于柱中，在柱的顶端加入一定量的料液后，连续输入流动相，料液中的溶质在固定相和流动相中发生扩散传质，产生分配平衡。分配系数大的溶质在固定相上存的几率大，随流动相移动的速度小；分配系数小的溶质在固定相上存的几率小，随流动相移动的速度大。 在层析柱出口，各溶质浓度随时间的变化图称作洗脱曲线。 层析的分类 ①按流动相的相态：气相层析法、液相层析法、超临界流体层析法。固定相可以是固体、液体、以固体为载体的液体薄层。生物物质一般在水溶液中，故生物分离一般采用液相层析法。 ②按固定相形状：液相层析分为纸层析、薄层层析、柱层析。纸层析和薄层层析主要用于分析（定性或定量），柱层析主要用于制备分离。 ③按操作压力：以固体为固定相的液相层析又分为低压（0.5MPa）、中压（0.5～4MPa）、高压（4～40MPa） ④按流动相的流向：轴向流层析和径向流层析。 轴向流层析：流动相从固定相的一端输入，沿轴向流向另一端。应用普遍。 径向流层析：柱心设一通透性细管，料液及流动相从柱的周围引入，从外表面沿径向流向柱心，透过中心管流出。优点：规模放大时半径不变，通过增大柱高提高处理能力，增加柱高不会增加压降，溶质浓度的分布较轴向流层析均匀，对固定相的机械强度要求不大，更适合大规模的分离过程。缺点：设备造价高。 ⑤按分离操作方式：洗脱层析、迎头分析、顶替展开。 洗脱层析：根据料液中的溶质在固定相和流动相间 分配行为的不同，在层析柱出口被展开形成相互分离 的层析峰。 迎头分析：与一般的固定床吸附操作相同，大量料液 连续输入到层析柱中，直到在出口处发生溶质穿透， 只有最先穿透的组分能以纯粹的状态得到部分回收， 之后流出液均为双组分或双组份以上的混合物。 顶替展开：流动相中含有与固定相的亲和力比料液中 各组分都大的物质（顶替剂），顶替剂将料液中的所含溶质按其与固定相亲和力的大小不同从柱中次序顶替（洗脱）出来。顶替展开法可使区带得到浓缩，适于大量处理稀溶液。 ⑥据溶质和固定相之间的相互作用机理分：凝胶过滤层析、离子交换层析、反相层析、疏水作用层析、亲和层析。 层析过程的理论基础？ ⒈ 平衡模型 ﹣该模型假定层析柱中不存在传质阻力、纵向扩散，溶质在两相中的分配瞬间达到平衡。 ﹣根据分配平衡和物料平衡对色谱过程进行处理，得出了洗脱时间（tR）和洗脱体积（VR）的公式。 当分配平衡符合线性关系时， Vo为孔隙体积，H为层析柱内固液体积之比。 该模型很粗略，初步揭示了物质在色谱柱内的迁移过程，非线性分布等温线也能比较好的解释不对称色谱峰，特别是拖尾色谱的成因。但其理论假设和数学处理都很简单，仅能显示线性分配平衡情况下柱内层析带的平均移动速度和柱内洗脱峰的平均停留时间，不能阐明色谱流出曲线方程，实际应用价值有限。但它为色谱理论的发展提供了有益指导。 ⒉ 理论板模型（塔板理论） 1941年，Martin和Synge提出的，他们把色谱柱设想成许多液-液萃取单元。 基本假设： ①色谱柱内径和柱内填料填充均匀，色谱柱由若干小段组成，这样一小段被称为一个理论塔板。每一小段的高度为理论板当量高度（HETP），塔板一部分为固定相占据，另一部分为流动相占据，且各塔板的流动相体积相等，称为板体积，以Ｖｍ表示。 ﹣层析柱中理论板的数目为N ；层析柱的高度为L。 ②每个塔板内溶质在两相瞬间达到平衡，纵向分子扩散可以忽略。 ③溶质在各塔板上的分配系数为一常数，分子纵向扩散可以忽略。 ④流动相通过色谱柱不是连续的，而是脉冲式的间歇过程。每次进入和从一塔板转移到另一塔板的流动相体积均为Vm。 ﹣系统中只有流动相流动时，达到出口所需的时间： τ=L/u ③ ﹣将③、①代入②得： ﹣若进料时间为t0，料液中溶质的浓度为C0，tt0后输入不含溶质的流动相，则式子的初始和边界条件为： ﹣当料液量很小式，可认为料液为脉冲输入，上式为洗脱曲线，呈Poisson分布（泊松分布）。若果N值很大，则溶质