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子情境六 免疫学应用 课程纲要 任务一、免疫学防治 任务一、免疫学防治 我国儿童计划免疫程序 任务二、免疫学诊断 检测抗原和抗体的反应 免疫细胞的测定 任务二、免疫学诊断 检测抗原和抗体的体外实验 1．抗原抗体检测原理 抗原抗体特异性结合 ? 检测。 2．血清学反应(血清学实验)：体外的抗原抗体反应。 3．抗原抗体反应的特点 特异性：抗原-抗体的结合。 可逆性：抗原抗体结合是分子表面的非 共价键结合。 比例性：抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例密切相关。 抗原-抗体反应的影响因素 1 电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液 ，以供给适应浓度的电解质。 2 温度：一般常使用反应在37度水浴 或孵育箱中进行。 3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度 为PH6~8。 抗原抗体反应又称血清学反应，主要有： 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、免疫标记技术 单向琼脂扩散 是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。 双向琼脂扩散  是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性 、组成和两种抗原相关性分析的检测。 是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，FITC) 与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。 包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。 直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。 间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。 补体结合免疫荧光法：此法是在间接法的第一步抗原—抗体反应时加入补体，使之与抗原——抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3抗体进行示踪。  是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，HRP和碱性磷酸酶，AP) 标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。 常用的方法 酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) ：是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法等。测定可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法：测定组织中或细胞表面的抗原。 免疫印迹法(Immunoblotting) 是将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量。常用于检测多种病毒 如HIV 的抗体或抗原。 淋巴细胞类型和数量的测定 1、花结试验：E花结试验可用于检测T细胞数目。EA花结试验可用于检测B细胞数目。 2、免疫荧光法：常采用间接免疫荧光法。 3、流式细胞术：借助流式细胞仪（FCM)。 任务二、免疫学诊断 * LOGO 任务一、 免疫学防治 任务二、 免疫学诊断 特异性免疫类型 自然免疫 人工免疫 自然主动免疫：自然感染 自然被动免疫：母体抗体通过胎盘（IgG）或 初乳（SIgA）输给婴儿 人工主动免疫：接种疫苗、类毒素 人工被动免疫：注射动物免疫血清、胎盘球 蛋白、转移因子等 1．死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。如伤寒菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。 2．减毒活疫苗是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。 3．类毒素：外毒素0.3-0.4%甲醛 类毒素，如百白破三联疫苗。 4 ．新型疫苗 1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。如血源性乙肝疫苗、脑膜炎球菌疫苗。 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。 （无需培养微生物，可大量生产，无致癌、返祖的危险性） 3）基因工程疫苗 编码免疫原基因→载体→体内 ↓ 酵母菌、大肠杆菌（体外培养） 如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物