食品微生物检验学实验指导.docVIP

食品微生物检验学实验指导 课时分配及主要实验内容(总学时30,其中动检20,动食安30) 实验1 微生物检验常规试验预备 3 主要内容：菌落总数测定和大肠菌群检验所需的1）研钵、剪刀、镊子、吸管、平皿的包扎与干热灭菌；2）实验所需培养基（营养琼脂、EMB琼脂、乳糖胆盐发酵管）和生理盐水的配制、分装、包扎和高压蒸汽灭菌。 实验2 菌落总数测定 3 主要内容：1）样品的称取、匀浆和稀释；2）接种与琼脂倾注；3）24h后菌落计数及结果报告。 实验3 大肠菌群MPN测定 3 主要内容：1）样品的称取、匀浆和稀释；2）接种于乳糖胆盐发酵管，培养；3）24h后观察产酸产气情况，划线于EMB琼脂，培养；3）48h时观察菌落特征，革兰氏染色、镜检；4）查MPN检索表，报告结果。 实验4 蜡样芽孢杆菌检验 3 主要内容：1）将细菌肉汤培养物划线于普通琼脂、MYP琼脂，点种于卵黄琼脂平板，接种生化培养基，培养；2）24h时观察菌落特征，革兰氏染色、镜检；3）观察主要生化试验结果。4）报告。 实验5 致病性球菌检验 3 主要内容：1）将金黄色葡萄球菌和链球菌肉汤培养物划线于普通琼脂、血液琼脂，接种生化培养基，进行纸片法药敏试验，培养；2）24h时观察菌落特征，革兰氏染色、镜检；3）观察主要生化试验结果和药敏试验结果。4）报告。 实验6 魏氏梭菌检验 3 主要内容：1）形态及染色特性观察；2）细菌厌氧培养；3）家兔“泡沫肝”试验 实验7 霉菌检验 2 主要内容：1）观察曲霉、毛霉和青霉在PDA琼脂上的菌落特性；2）挑取霉菌培养物制备压片，在显微镜下观察霉菌菌丝、孢子等结构。 实验8 肉的微生物学检验 2 主要内容：1）鲜肉的感官性状观察；2）鲜肉压印片制备与镜检、细菌计数；3）微生物毒素呈色反应。 实验9 乳的微生物学检验 2 主要内容：1）鲜乳的感官性状观察；2）乳的涂片制备与镜检、细菌计数；3）美兰还原试验。 实验10 食品中沙门氏菌的检验 6 主要内容：1）沙门氏菌检验所需培养基的制备；2）细菌分离与菌落挑选；3）细菌生化试验；4）血清学鉴定；5）结果报告。 实验一 微生物检验常规试验预备 [目的与要求] 1.熟悉菌落总数测定和大肠菌群检验所需的各种培养基的制备。熟悉高压蒸汽灭菌器的使用。 2.熟悉玻璃器皿的包装与干热灭菌方法。 [主要内容]： 1 研钵、剪刀、镊子、吸管、平皿的包扎与干热灭菌。 2 实验所需培养基（营养琼脂、EMB琼脂、乳糖胆盐发酵管）和生理盐水的配制、分装、包扎和高压蒸汽灭菌。 1）配制700 mL生理盐水（0.9%NaCl），分别分装与5个盐水瓶，每瓶90 mL；分装18支试管，每管9 mL。 2）配制乳糖胆盐培养基（发酵管）200 mL，并分装于小试管各3 mL，每管中加入一个充满培养基的小倒管，注意一定不能有气泡。（配方：2%蛋白胨，0.5%猪胆盐，1%乳糖，调pH7.4，然后加入0.4%溴甲酚紫2.5ml/100ml） 3）配制普通琼脂培养基400ML，分装于2 个三角瓶。（0.5%NaCl，1%蛋白胨，0.3%牛肉粉（膏），pH7.4，琼脂粉1.5%） 4）配制伊红美蓝培养基300 mL。（配方：蛋白胨1%，NaCl 0.5%，牛肉膏0.3%，pH7.4，琼脂粉1.5%，加热溶化后加入乳糖1%、2%伊红水溶液2 mL/1000 mL、0.65%美蓝1 mL/1000 mL） 5）TTC培养基 （1）2%乳糖发酵管40支，每管2.5ml（2%乳糖，2%蛋白胨）。 （2） TTC培养液100ml（2%蛋白胨，1%Nacl，1%Na2HPO4.12H2O,0.4%十二烷基硫酸钠，PH7.4） （3）灭菌后加10%TTC8ml后分装于（1），每管加2.5ml。 6）DC培养基（0.5%蛋白胨，0.5%Nacl，1%乳糖，0.3%K2HPO4.3H2O，0.2%柠檬酸铁铵，琼脂粉0.7%）溶于水后调PH7.2，加入10%去氧胆酸钠 1ml及0.4%溴麝香草酚兰1.6ml。 [思考题] 1 配制培养基时的一般原则和注意事项？ 2 使用高压灭菌器和恒温干燥箱的注意事项？ 实验二 菌落总数测定 [目的与要求] 通过本试验要求掌握食品的菌落总数测定的方法，菌落计数和报告方式，以及经常食用的各类动物性食品的菌落总数标准。 菌落总数是指食品检样经过适当处理，在一定的条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数，其也是判定食品被污染程