基于“肾为先天之本”2型糖尿病肾虚证的mirna研究-中西医结合基础专业论文.docxVIP

成都中医药大学博士学位论文基于 成都中医药大学博士学位论文 基于‖肾为先天之本‖2 型糖尿病肾虚证 miRNA 研究 PAGE PAGE 4 HYPERLINK \l _bookmark0 1. 材料与方法 59 HYPERLINK \l _bookmark1 1.1 主要试剂及仪器 59 HYPERLINK \l _bookmark2 1.2 引物的设计、合成及相关网站 60 HYPERLINK \l _bookmark3 1.3 实时定量 PCR 实验步骤 61 HYPERLINK \l _bookmark4 2. 实验结果 63 HYPERLINK \l _bookmark5 2.1 样本总 RNA 质检结果 63 HYPERLINK \l _bookmark6 2.2 各基因定量 PCR 扩增产物的鉴定 63 HYPERLINK \l _bookmark7 3.讨论 67 HYPERLINK \l _bookmark8 4.小结 68 HYPERLINK \l _bookmark9 参考文献68 HYPERLINK \l _bookmark10 结 论77 HYPERLINK \l _bookmark11 致 谢 78 HYPERLINK \l _bookmark12 综述 表观遗传学在 T2DM 研究及肾本质研究进展79 HYPERLINK \l _bookmark13 1.表观遗传学在 T2DM 中的研究进展 79 HYPERLINK \l _bookmark14 2. 肾本质的研究进展 84 HYPERLINK \l _bookmark15 附件 1：肾虚证辩证因子及等级量化表101 HYPERLINK \l _bookmark16 附件 2：miRNA 芯片及 qPCR 所选样本肾虚量表评估 105 HYPERLINK \l _bookmark17 附件 3：公开发表的学术论文、专著及科研成果 107 中文摘要 目的: 糖尿病已经成为威胁人民健康的重要非传染疾病之一，在我国尤其以 2 型糖 尿病为主。2 型糖尿病的发病既有复杂的遗传背景，同时与环境等因素密切相关。 以 2 型糖尿病为载体，从中医 ―肾为先天之本‖ 理论为基础，能够更好的阐述―遗 传-环境-疾病‖相互作用和中医的整体观。本文在前期全基因组表达谱研究平台 上,引入 miRNA 芯片技术，旨在探索 2 型糖尿病肾虚证的表观遗传学机制。 1. 通过对中医古籍中消渴病的梳理和对现在表观遗传学方法的探讨，从理论上 讨论将表观遗传学方法引入到中医藏象学的研究的创新和应用价值。 2. 通过对 793 例成都地区 2 型糖尿病患者的家族史回顾性调查，揭示遗传因素 对肾虚证的影响。 3. 从 2 型糖尿病患者中筛选出 8 例典型肾虚证和非肾虚证患者，并分别和 4 例 正常人对比，分析差异表达 miRNA 并筛选意义较大的 miRNA 进行 PCR 验 证，从分子水平初步探讨肾虚证糖尿病的分子机制变化。 方法 1．2型糖尿病人群的病证结合研究：采用肾虚证辨证因子及等级量化表对2型糖 尿病人群面对面进行病证结合调查，采用统计学分析方法，探讨分析肾虚证 糖尿病人群的分布特征。 2．miRNA表达谱芯片异常表达基因的筛选：采用miRNA表达谱芯片技术，对筛 选的12例样本分3组两两对比，进行miRNA基因表达谱试验，对差异miRNA 进行靶基因预测。 3．对miRNA表达谱芯片分析结果的qPCR验证：通过筛选出的―肾虚-非肾虚‖组 FC较大的差异miRNA，通过PCR方法进一步验证分析结果。 结果 1. 通过对历代中医古籍文献的梳理发现肾虚是消渴发病的重要因素之一。结合 表观遗传学方法，能丰富 2 型糖尿病的肾虚证候微观本质。 2．调查2型糖尿病病患793例,有明确家族史的患者169例，占全部21.3 %, 其发病 率无性别差异。有2型糖尿病家族史组的肾虚患者百分比明显高于无2型糖尿 病家族史组，两组肾虚患者人数百分比比较有统计学意义，提示―肾虚‖可能 在2型糖尿病家族聚集中起一定的作用。 3. 肾虚证、非肾虚