厚朴抗氧化活性成分的提取分离及其抗氧化活性测试研究-化学专业论文.docxVIP

中文 中文摘要 重庆大 重庆大学硕士学位论文 I I PAGE PAGE VI 摘 要 厚朴药材是木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮，属重庆道 地药材。厚朴中主要含有挥发油、木脂素类、生物碱类、多糖类等化学成分，具 有抗菌、抗炎等药理作用，具有一定的研究价值。目前，对厚朴的研究主要集中 在木脂素类成分厚朴酚、和厚朴酚的提取工艺及抗菌等药理作用，对厚朴中其他 活性成分及生物活性研究甚少。因此，本论文主要针对厚朴药材中的活性成分木 脂素类、生物碱类、多糖类成分进行提取分离，并对分离制备的厚朴提取物、厚 朴活性成分及其有效成分的抗氧化活性进行评价，为厚朴药材的进一步开发利用 提供科学依据；利用耗样量低、集成化的微流控技术，结合化学发光抗氧化体系 反应过程及原理，搭建微流控化学发光检测系统，用以药物的抗氧化性评价，实 现天然产物抗氧化成分的快速筛选。 本文的主要研究工作及结果包括： 1. 以厚朴药材具有抗氧化活性的成分及化合物为目标，采用不同溶剂体系提 取制备得到厚朴水提物、60%乙醇提取物、80%乙醇提取物，采用 HPLC 法及 Folin -Ciocalteu 法测定其厚朴酚、和厚朴酚含量及总酚含量，初步了解提取物中物质组 成情况及其抗氧化活性，其中，80%乙醇提取物中厚朴酚、和厚朴酚含量最高，分 别为 209.4 mg/g、159.8 mg/g，总酚含量为 228.3mg GAE/g。进而，从提取物中分 离得到厚朴中木脂素、生物碱、多糖三类活性成分作为后续抗氧化活性测试样本。 采用水提醇沉法制备厚朴粗多糖，苯酚-硫酸法测定其含量为 50.8%；采用有机溶 剂提取法制备厚朴总生物碱，酸性染料比色法检测其含量为 63.8%；采用大孔树脂 吸附技术分离制备厚朴木脂素，显色法测定其含量为 87.2%。采用紫外分光光度法， 实现对厚朴药材中厚朴酚、和厚朴酚的含量进行同时测定，检测结果略低于 HPLC 法测定结果，可用于厚朴药材有效成分的初步判断。以 80%乙醇为溶剂对厚朴进 行提取后，采用有机相萃取，并利用硅胶柱层析、薄层色谱法、重结晶等技术对 乙酸乙酯萃取部分进一步分离纯化，制备得到厚朴中的有效成分厚朴酚、和厚朴 酚，并采用紫外、高效液相、核磁共振等技术对其纯度、结构做鉴定，纯度分别 达到 97.14%、92.93%。将制备所得的厚朴的水提取、60%乙醇提取物、80%乙醇 提取物三种提取物，厚朴中粗多糖、总生物碱及木脂素三种活性成分，以及厚朴 中的有效成分厚朴酚、和厚朴酚两种单体化合物作为后续抗氧化活性测定的样本， 为厚朴抗氧化活性成分的确定奠定物质基础。 2. 采用邻苯三酚-鲁米诺体系、过氧化氢-鲁米诺体系、Fe2+-过氧化氢-鲁米诺 体系三种化学发光体系对制备的厚朴水提物、60%乙醇提取物、80%乙醇提取物、 厚朴粗多糖、厚朴总生物碱、厚朴木脂素、厚朴酚、和厚朴酚七种样本对超氧阴 离子（O2-?）自由基、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（?OH）的清除能力进行测定， 并以抗坏血酸作为阳性对照物，计算得到不同样本对不同自由基的半数抑制浓度 IC50 值，用以评价各成分抗氧化活性。结果表明：厚朴各成分均对三种自由基有一 定的清除作用，其中，对过氧化氢（H2O2）自由基的清除能力最强，且强于阳性 对照物。另外，厚朴水提物、60%乙醇提取物、80%乙醇提取物抗氧化活性大小依 次为：80%乙醇提取物60%乙醇提取物水提物；厚朴粗多糖、总生物碱、木脂素 抗氧化活性依次为：总生物碱木脂素粗多糖；就厚朴中两种有效成分而言，和 厚朴酚对三种自由基的清除能力远远强于厚朴酚，也强于阳性对照物。结果表明， 厚朴中成分大多具有良好的抗氧化活性，具有一定的研究及利用价值。 3. 根据化学发光反应原理及反应过程，设计并制作了集成八个检测通道于一 体的微流控化学发光芯片，该芯片具有结构简单、耗样量小、检测快速等优点。 在微流控化学发光芯片上实现对厚朴酚、和厚朴酚清除过氧化氢自由基（H2O2） 的能力进行在线测定，测定结果与微孔板化学发光法检测结果基本一致，证明了 该芯片体系的可行性，在抗氧化活性检测及筛选上具有明显的优势和潜在的实用 价值。 关键词：厚朴，抗氧化，化学发光，微流控芯片 英文摘 英文摘要 重庆大 重庆大学硕士学位论文 III III PAGE PAGE IV ABSTRACT Magnolia officinalis cortex, as a geo-authentic crude drug of Chongqing China, is the dry root bark and branches of Magnolia officinalis Rehd. et Wils.or Magnolia officinalis Rehd