精液实验室的规范操作温氏集团原内部资料.ppt

股份公司生产技术部 2006-10-9 实验室操作 1、实验室的设计 2、卫生 3、规范操作 一、实验室的设计 看看以下儿张图片，有一个简单、直观的映象 二、卫生 1、仪器的清洗 2、室内卫生 3、室外卫生 仪器的清洗 仪器清洗是否干净直接关系到实验室各项工作的顺利进行。如玻片没洗干净，精检时，精液中杂质增加、死精增加，活力下降、从而误认为公猪出现问题。从反面来说，当公猪精检突然出现问题时，作为实验室人员，先查查蒸馏水是不是换了；清洗仪器的水有没有不正常的现象；清洗仪器的人是不是换了新手等。当实验室内所有的可能都排除了以后，再反映到公猪舍，近段时间有没有采取什么措施。 室内卫生 室内要求： 每天一小扫， 每周一大扫。 室外卫生 室外要求每月清扫、消毒一次，消毒需在精液都放入冰箱或是都发出去以后才进行，因为大部分的消毒药对精子有很强的杀伤力。 规范操作 1、采精杯的制作、保温；---37度 2、精检 3、1：1稀释；---尽快稀释，避免降温打击 4、分阶段稀释；---避免高倍稀释打击 5、分装；---稳定后再分装，防震 6、保存；---避免精子聚积 7、运输。---防震、保温。 规范操作 采精杯的制作 1、采精杯的制备：先在保温杯内衬一只一次性食品袋，再在杯口覆一层过滤纸，用橡皮筋固定，要松一些，使其能沉入2cm左右。制好后放在37°C恒温箱备用。 2、冬天温度较低，为了保证采精杯内温度达到37度，采精杯盖与杯分开放置，采精时，盖好再发出公猪舍。 规范操作 精检 1、精检包括：采精量、密度、活力、颜色、气味、畸型率等。 2、精液量 ：后备公猪的射精量一般为150～200毫升，成年公猪为200～600毫升，称重量算体积，1克计为1毫升。 3、颜色：正常精液的颜色为乳白色或灰白色。如果精液颜色有异常，则说明精液不纯或公猪有生殖道病变，凡发现颜色有异常的精液，均应弃去不用。同时，对公猪进行检查，然后对症处理、治疗。（有兴趣可以做一下保存） 规范操作 精检 4、气味： 正常的公猪精液具有其特有的微腥味，无腐败恶臭气味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它异物，一旦发现，不应留用。并检查采精时是否有失误，以便下次纠正做法。 5、密度 指每毫升精液中含有的精子数，它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.0～3.0亿／毫升，有的高达5.0亿个精子/毫升。检查精子密度的方法常用以下两种：密度仪测量，用计数板测量。 规范操作 计数板计算密度 红细胞计数法：该法最准确，但速度慢，其具体操作步骤为： 用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精100微升和3%的KCl溶液900微升，混匀。在计数板的计数室上放一盖玻片，取少量上述混合精液放入计数板槽中。在高倍显微下计数5个中方格内精子的总数，将该数乘以50万即得原精液的精子密度。 规范操作-精检 50万的来由 在计数板上会标有“1/400”的字样，这是表示一个小方格的面积S1=1/400mm2； 计数板的高度为H1=0.1mm； 从以上两项则得出：一个计数室的体积为：V1=1/400 mm2×16（一个中方格有16个小方格）×25（一个计数室有25个中方格）×0.1mm=0.1mm3； 假定我们数5个中方格的总精子数为n个；则一个计数室的总精数为5n； 1ml=1cm3=（10mm）3=103mm3=104V1；则V1=10-4 ml 我们现在计算出1：10稀释后的密度（即1 ml内有多少个精子）： C1=5n个/10-4 ml=5n×104个； 原精的密度C=10C1（原精通过1：10稀释做成计数板）=5n×105个 =50万×n=0.005亿×n 所以我们1：10稀释做计数板，则数出5个中方格的总精数乘以0.005则得出该份精液原精的密度。 如果我们是1：20倍稀释则应乘以0.01，似此类推。 规范操作 精检 6、精子活力 精子活力的高低与受配母猪的受胎率和产仔数有较大的关系。因此，每次采精后及使用精液前，都要进行活力的检查，检查精子活力前必须使用37℃左右的保温板预热：一般先将载玻片放在38℃保温板上预热2至3分钟，再滴上1小滴精液，盖上盖玻片，然后在显微镜下进行观察。精子活力一般采用10级制，即在显微镜下观察一个视野内作直线运动的精子数，若有90%的精子呈