201高0fx3-1基因工程.ppt

Genetic Engineering 2) 导入动物细胞 原核生物的特点:繁殖快、单细胞、遗传物质少 ⑴ 基因工程药品的生产 　　许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限，其价格往往十分昂贵。 　　微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内，让它们产生相应的药物，不但能解决产量问题，还能大大降低生产成本。 1、医药卫生 　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 　　将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！使其价格降低了30%-50%! 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 人工合成胰岛素 　　从人血中提取干扰素，300L血才提取1mg！ 通过基因工程的方式创造了能合成人干扰素的大肠杆菌，每1Kg的培养液可提取20—4mg干扰素。 　　 人工合成干扰素 人造血液及其生产 重组DNA医药产品 预防霍乱 口服重组B亚单位菌体霍乱菌苗 预防乙肝 乙肝疫苗(CHO, 酵母) 利用其结合特异性进行诊断试验、肿瘤导向治疗 单克隆抗体 抗组织损伤 超氧化物歧化酶 激活、剌激各类白细胞 白细胞介素 抗病毒感染及某些肿瘤 干扰素(? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 治疗糖尿病 胰岛素 治疗侏儒症 生长素 刺激细胞生长与分化 生长因子(bFGF, EGF) 剌激白细胞生成 促红细胞生成素 剌激白细胞生成 颗粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子 促进凝血 血液因子VIII 抗凝 组织胞浆素原激活剂 功 能 产 品 ⑵ 基因诊断与基因治疗 　　运用基因工程设计制造的“DNA探针”检测肝炎病毒等病毒感染及遗传缺陷，不但准确而且迅速。 　　通过基因工程给患有遗传病的人体内导入正常基因可“一次性”解除病人的疾苦。 1、医药卫生 生物芯片 　　从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。 　　通过比较、分析这两种图谱，就可以得出病变的DNA信息。 　　基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点，将成为一项现代化诊断新技术。 基因芯片扫描仪 芯片数据处理 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯 不会引起过敏的转基因大豆 2、农、牧业及食品工业 1、PCR技术的原理　 ⑥缓冲溶液 ①DNA复制原理 ②DNA热变性原理 2、条件 ①模板——双链DNA分子(目的基因) ②原料——游离的4种脱氧核苷酸 ③酶——Taq DNA聚合酶 ④2种引物（RNA）——人工合成，与要扩增的DNA片段两侧序列互补，引导DNA子链形成。 ⑤高温——供能变性解旋 （1）变性 （2）复性 （3）延伸 3、过程 ——90℃，第一次10min，最后一次1min ——50℃，30sec 在DNA聚合酶作用下配对延伸子链 (目的基因)DNA受热变性解旋 引物分别与两条DNA单链互补配对 ——72℃，1min 4、特点： 1、体外复制； 　　2、大量获取目的基因（指数式增长）； 　　3、原理和操作简单。 3、化学合成法获取目的基因 由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列 　　根据蛋白质的氨基酸顺序推算出mRNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 DNA合成仪 非编码区 非编码区 编码区 编码区下游 编码区上游 RNA聚合酶结合位点 调控遗传信息的表达 基因的结构（原核细胞） 非编码区：不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质 。 编码区：能够转录为相应的信使RNA，进而指导蛋白质的合成，也就是说能够编码蛋白质 。 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区上游 内含子:不能够编码蛋白质的序列叫做内含子，内含子能转录为信使RNA 。 外显子:能够编码蛋白质的序列。 基因的结构（真核细胞） 真核细胞和原核细胞的基因结构比较 1）相同点： 2）不同点： 原核的编码区是连续的，而真核的是间隔不连续的。 都是由编码区（编码蛋白质）和非编码区（调控作用）组成。 2、目的基因与运载体结合——构建表达载体 DNA 质粒 重组质粒 （表达载体） 目的基因 (2个切口/ 4个黏性末端) DNA连接酶 运载体 (1个切口/ 2个黏性末端) 同种限制酶处理 第二步：基因表达载体的构建 （使目的基因能稳定遗传、表达发挥作用） 启动子：一段特殊结构的DNA片段，位于基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。 终止子：使转录停止。 标记基因：鉴定