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胶体金常用的生物材料种类及检测反应模式,结果判读模式的介绍 内容 胶体金常用的生物材料种类 检测反应模式 结果判读模式 胶体金常用的生物材料种类 胶体金检测是一种免疫测定,免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。 胶体金常用的生物材料主要是指抗原和抗体。 抗原 抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。在免疫测定中,抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。 抗原的反应性取决于抗原决定簇(antigenic determinant),或称为表位(epitope)。一个抗原分子可带有不同的决定簇。 用于胶体金检测的抗原抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类 。 天然抗原 天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等(例如AFP从脐带血或胎肝中提取)。 重组抗原 重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。 重组抗原的优点是除工程菌成份外,其他杂质少,而且无传染性,但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份,用于胶体金,在反应中可出现假阳性,因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。 重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培养成功,而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCV 胶体金中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。 合成抗原 合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。 多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇,纯度高,特异性也高,但由于分子量太小,往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质(BSA)等偶联,借助于偶联物与固相载体的吸附,间接地结合到固相载体表面。 应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇,因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。 另外,某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化,在这种情况下,用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。 抗体 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。 机体被微生物感染后,先产生IgM抗体,然后产生IgG抗体。经过一段时间,IgM抗体量逐渐减少而消失,而IgG抗体可长期存在,在疾病痊愈后可持续数年之久。 IgM抗体一般为保护性抗体,具有免疫性。因此IgM抗体的测定,对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。 抗体按制备过程和抗体性质可分为单克隆抗体和多克隆抗体。 单克隆抗体是通过单组细胞分泌出来的抗体,最终以小鼠腹水形式出现,经纯化,成为可使用的IGg类型的生物材料。 多克隆抗体是指有多组细胞分泌的抗体,一般为二抗,如羊抗鼠等。 还有一种多抗,在免疫动物时当成免疫抗原来使用,即鼠IGg,羊IGg等通过取动物血,再经纯化得到的材料,此类生物材料和二抗配套使用。 单抗的优点是特异性好,但灵敏度可能较差,而多抗的优点是灵敏度度好,结合能力强,但特异性较差。 我们可根据具体情况选择使用的材料。 公司目前使用的材料介绍 重组抗原类:HIV包被、标记,HCV包被、标记,TP包被、标记等 天然抗原类:Sb标记等 合成抗原类:毒品类包被抗原 单抗类:Sg,eAg,HCG等品种的包被标记的材料 多抗类:C线材料,A线材料,抗红细胞抗体(锁血用),抗人IGg 有时公司为了节省成本,将部分单抗的腹水先购回,再自行进行纯化,这类材料多了一个纯化步骤,拉长了生产周期。 如PF,流感。 多抗类的材料也可以通过购买血清进行纯化使用。 二、检测反应模式 检测目标物为抗原 抗原检测是最快捷,最直接的得到结果的方式,但每一种目标物抗原存在的位置各异,在现在的体液检测标本中不易分离出来(如病原微生物寄生于细胞内,HIV,HCV等),故只是部分项目采用了抗原检测。如Sg等。 检测目标物为抗体 一些抗体检测是为了监控抗体水平而进行的直接检测,如Sb;但是相当多的抗体检测是为了看到病毒抗原的水平而进行的。当病毒侵入人体一段时间后,会产生相应的抗体,而抗体在血液中极易得到,故很多无法提取到抗原的项目,可以通过抗体的水平来反映病毒抗原的状况。如HIV/
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