天然药物化学 第五章 黄酮类化合物.pptVIP

黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律： ①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷?双糖苷?单糖苷?苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮?具有对位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般是： 异黄酮?二氢黄酮醇?黄酮?黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。 三、用聚酰胺柱色谱分离下述化合物, 以不同浓度的甲醇进行洗脱, 其出柱先后顺序为? (C )→(A )→(D )→( B ) 三、分离 第三节 黄酮类化合物的提取于分离 （一）柱层析法 主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小?大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大?小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷?糖少的苷?游离苷元（极性小?大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 　　　　　　 ②醇及含水醇 　　　　　　 ③含水丙酮，甲醇－氯仿 3. 葡聚糖疑胶(Sephadex gel)柱层析： 第三节 黄酮类化合物的提取于分离 （二）梯度pH萃取法 适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂（如乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取，来达到分离的目的。 酸性：7，4?-二OH ? 7-或4?-OH ? 一般酚OH ? 5-OH黄酮 溶于：5%NaHCO3液 5%Na2CO3液 0.2%NaOH液 4%NaOH液 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 目前主要采用的方法有： ①与标准品或与文献对照PC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf?100）　 ②分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或金属盐类试剂后得到的UV光谱 ③1H-NMR ④13C-NMR ⑤MS 一、色谱法在黄酮类鉴定中的作用 1. 纸色谱(PPC) 苷类成分可采用双向展开，第一相展开采用醇性溶剂，如BAW系统（正丁醇： 醋酸：水4：1：5上层）；第二相展开用水性溶剂，如2%~6%HOAc、3% NaCl等。 苷元则多采用醇性溶剂。 花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 一、色谱法在黄酮类鉴定中的作用 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 纸色谱中Rf值与结构的关系： 1、水溶性溶剂展开时，平面型分子(黄酮、黄酮醇、查耳酮)几乎在原点不动，非平面型分子(二氢黄酮、二氢查耳酮)Rf值较大。 2、醇性展开剂时，同一类型苷元，羟基越多， Rf值越小；羟基被甲氧基取代， Rf值增大；羟基糖苷化，极性增大， Rf值下降。 2. 硅胶薄层色谱 用于分离鉴定弱极性黄酮类化合物较好。 常用展开剂甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）；苯：甲醇(95: 5)或苯：甲醇：冰醋酸（35：5：5）等。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 3. 聚酰胺薄层色谱 适用范围广，可分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。 常用展开系统：乙醇：水（3：2）；丙酮：水（1：1）等。 显色剂：紫外光；2%三氯化铝甲醇液； 1%FeCl3 /1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。 一般程序： ①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型； ②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂(甲醇钠、乙酸钠等)后测UV谱和可见光谱以了解3, 5, 7, 3’, 4’有无羟基及邻二酚羟基； ③苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。 二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用 （一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱 多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成： 带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃迁所引起； 带II在220-280nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。 第四节 黄酮类化合物的检识与结构鉴定 ? 带II(240-285nm)（苯甲酰系统） 带I(300-400nm) 桂皮酰系统 类 型 说 明 ? ? 250-285 304-350 黄酮类 -OH越多，带I带II越红移 ? B环3’,4’有-OH基，带II