第四章瘤蛋白质的化学.ppt

二 蛋白质的变性(denaturation) 变性是指蛋白质受物理或化学因素的影响,使蛋 白质分子原有的特定的空间构象发生改变,从而 导致蛋白质性质的改变以及生物活性的丧失.但 一级结构未遭破坏. 1.变性蛋白质的特性 ： 变性蛋白质主要标志是生物学功能的丧失 溶解度降低,易形成沉淀析出,粘度增加而扩散系数减小结晶能力丧失,分子形状改变,肽链松散,反应基团增加,易被酶消化 2.变性的因素 物理因素: 加热、紫外线、X-射线、超声波等. 化学因素: 酸、碱、有机溶剂、蛋白变性剂(尿 素、盐酸胍)、重金属盐等. 3.蛋白质的复性(renaturation) 除去变性因素后,有的变性蛋白质又可恢复其天 然构象和生物活性,这一现象称为蛋白质的复性 蛋白质的一级结构决定高级结构 三 蛋白质的两性电离与等电点 等电点(pI):在某一pH值溶液中,蛋白质酸性基团 和碱性基团的解离程度相当,蛋白质分子所带正 负电荷相等,净电荷为零.此时溶液的pH值称为蛋 白质的等电点(pI). 四 蛋白质的胶体性质 蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围,在溶 液中能形成稳定的胶体,具有胶体溶液的典型性质如布郎 运动、丁达尔现象、不能透过半透膜、具有吸附能力等. 蛋白质的亲水胶体溶液相当稳定： 1.表面亲水基团吸引周围的水分子,使水分子定 向排列在它的周围,形成“水化层”. 2.蛋白质在非等电点时带有同种电荷, 同种电荷相斥,使蛋白质分子保持一定 的距离而不聚合. + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 五 蛋白质的沉淀反应(pre-cipitation) 当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质 的构象时,蛋白质就会从溶液中析出,这种现象 称为蛋白质的沉淀 使蛋白质沉淀的方法: 盐析法(salting out) 向蛋白质溶液中加入大量中性盐 低浓度中性盐：盐溶作用 高浓度中性盐：盐析作用 常用的中性盐：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等 作用原理:盐离子与水亲和力极强,夺去蛋白质的 水化层,减少分子间静电斥力 特点：不破坏蛋白质的构象,蛋白质不发生变性 分段盐析：调节盐浓度,可使混合蛋白质溶液中 的几种蛋白质分段析出. 如 血清球蛋白(50硫酸铵饱和度) 清蛋白(饱和硫酸铵) (2)有机溶剂沉淀法 原理:使蛋白质脱去水化层,又能降低溶液的介电 常数使蛋白质表面电荷减少,导致蛋白质分 子聚集而沉淀. 常用有机溶剂:甲醇、乙醇、丙酮 缺点：常会使蛋白质变性 注意事项:必须低温下操作,尽量缩短处理的时间 重金属盐沉淀法 原理:重金属离子如Hg2+、Ag+、Pb2+等带有正电荷,能与蛋白质分子中带负电基团结合,生成不溶性的重金属蛋白盐而沉淀. 若溶液pH大于蛋白质的pI,沉淀更易发生 缺点：此法常使蛋白质变性失活 (4)加热: 变性导致沉淀 (5)生物碱试剂和某些酸类沉淀法 原理:生物碱试剂(如鞣酸、苦味酸、钨酸等),某些酸类(三氯乙酸、磺酰水杨酸和硝酸等),与带正电的蛋白质结合生成不溶性的盐而沉淀 注意事项:反应溶液的pHpI,确保蛋白质以阳离 子形式存在 缺点：此法常使蛋白质变性失活 六 蛋白质的颜色反应 七 蛋白质的免疫学性质 1.抗原(antigen,Ag):外源和非自身的能被免疫系统识别并产生免疫应答的物质. 免疫原性(Immunogenicity):能刺激生物体产生免疫应 答并产生抗体或免疫淋巴细胞的特性. 免疫反应性(Specific reactivity):能与所产生免疫应 答产物进行结合并发生反应的能力. 半抗原(Hapten)-不具免疫原性只具免疫反应性的物质. 抗原决定簇(Determinant):是抗原引起免疫应答 和与抗体结合反应的基本结构单位. 常位于抗原分子的表面,由3-8个氨基酸构成. 分为a.构象决定簇 b.顺序决定簇 2.抗体(antibody,Ab):能与抗原特异性结合,并 具免疫功能的球蛋白. 免疫球蛋白(immunoglobulin Ig)抗体活性及和抗 体结构类似的球蛋白家族 多克隆抗体(polyclonal antibodies)： 针对各种抗原决定簇的许多不同的抗体. 单克隆抗体(monoclonal antibody McAb)： 针对单一抗原决定簇 抗原抗体反应具有高度特异性 3 蛋白质