分子诊断离-刘斌.ppt

分子诊断在病理诊断中的应用 兰州军区总医院病理科 刘 斌 肿瘤的发生根本原因是由于基因的异常改变引起。随着分子生物学的发展，特别是人类基因组计划的顺利实施、人类基因组序列的剖析、相关基因功能的识别，对肿瘤的发生、发展及转归机制有了更深入的了解，使人类除了能更早期发现及诊断肿瘤外，还可预测人群或个体发生肿瘤的风险（肿瘤易感性）、病因检测、肿瘤的恶性特征、对特定治疗手段的反应（疗效预测）、转移复发的可能与早期发现等，进行肿瘤诊断、分类、判断预后及指导治疗。 如今检测癌患者的基因状态有很多方法： IHC，FISH，CISH，Southern Blot，PCR，Real Time PCR。现如今FISH技术已应用于实体瘤、血液肿瘤、产前产后多个领域。 荧光原位杂交 Fluorescence in situ hybridization 原理 利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单 链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上 的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况 FISH检测类型 基因过表达的检测 基因突变及其检测 基因的易位与重排 染色体数目的检测 端粒酶与肿瘤的关系检测 一.基因过表达检测 1.对HER2的检测 FISH技术对HER2基因的检测 HER-2基因为致癌基因，位于17q11.2-q12 可编码跨膜蛋白，基因有扩增的乳腺癌对三苯氧胺不敏感。 HER-2基因扩增是决定Herceptin是否有效的关键性指标。 乳腺癌和胃癌中HER2基因的扩增比率 所做乳腺癌中HER2基因检出阳性率为65%；胃癌中HER2基因检出阳性率为35.7%。 2.非小型细胞肺癌中EGFR基因扩增的检测 NSCLC中EGFR基因扩增 EGFR功能 EGFR在多种上皮性肿瘤高表达, 其过表达与肿瘤细胞的增殖、活动性、粘连性、侵袭性、凋亡抑制和血管生成相关, 最终导致细胞的转化、增殖, 抵抗细胞凋亡、促进细胞生存, 与肿瘤的发生、发展、临床分期、生存期、预后和对治疗反应相关。 目前应用于NSCLC的靶向治疗药物 吉非替尼(gefitinib, ZD-1839,商品名Iressa 2003 FDA approved) 厄洛替尼 (erlotinib,OSI-774,商品名Tarceva 2004 FDA approved) 西妥昔单抗: (cetuximab FDA 2004 approved) EGFR基因突变 突变率在33%左右，其中腺癌高达48%（董强刚等 2006） 东方亚裔明显高于高加索人种、女性高于男性、非吸烟高于吸烟 EGFR19、21外显子的突变占95%左右 EGFR 变异使EGFR 酪氨酸激酶ATP结合位点的某些关键基团发生重构, 使得小分子酪氨酸激酶抑制剂更易与之结合，增强了与ATP竞争性抑制剂的相互作用 全球突变型NSCLC用Iressa/Tarceva有效率约80%； 无突变NSCLC用ressa/Tarceva有效率约10%。 K-RAS基因突变的检测 KRAS基因属于RAS家族的一员，包括K-RAS,N-RAS,H-RAS 具有GTP酶活性，活化状态与GTP结合，失活与GDP结合，绝大部分细胞是与GDP结合的非活化状态 参与调节细胞生长、增殖、分化与凋亡 15-20%的NSCLC存在RAS基因突变，其中90%以上是K-RAS突变，12号密码子的突变占80%以上。而腺癌的病人突变占30%，K-RAS突变与吸烟密切相关，终生未吸烟的未发现K-RAS基因突变与EGFR基因突变存在排斥性 是Gefitinib与Erlotinib原发耐药的分子标记之一 在直肠癌中K-ras基因突变的患者不会从EGFR单抗靶向治疗中获益，K-ras野生型患者对cetuximab/Erbitux（爱必妥）和panitumumab/Vectibix（维克替比）单药或与基础化疗联合治疗的反应率显著大于突变型患者。 现临床通常将EGFR和K-RAS基因联合检测，来针对非小细胞肺癌进行靶向治疗，对拟行TKI治疗的患者，可以首先检测KRAS突变状态，排除阳性后对KRAS阴性者进行EGFR突变检测；若EGFR突变阳性，选择TKI治疗。 1.慢性淋巴细胞白血病（CLL）检测 通过对P53、RB1、D13S25、ATM基因以及12号染色体检测来判断预后。 2.慢性粒细胞白血病（CML）检测BCR/ABL融合基因 1.辅助诊断CML 2.指导格列卫用药 3.药物使用效果评估 4.骨髓移植效果评估 3.急性早幼粒细胞白血病（M3）检测PML/RARA融合基因。 指导全反式