地塞米松影响肝细胞糖代谢的机制及吡格列酮的干预作用探讨-内科学(内分泌学)专业论文.docxVIP

摘要地塞米松影响肝细胞糖代谢的机制及吡格列酮 摘要 地塞米松影响肝细胞糖代谢的机制及吡格列酮 的干预作用探讨 研究生 王丹萍 导师 栗夏连 郑州大学第一附属医院 内分泌科 郑州450052 摘 要 背景与目的 糖皮质激素广泛用于抗过敏和自身免疫性疾病及器官移植后免疫抑制等方 面的治疗，在取得显著疗效的同时也带来了高血压、糖尿病和骨质疏松等副作 用。其中类固醇性糖尿病是最严重的副作用之一，在临床上很常见，但其确切 的发病机理尚不清楚。糖皮质激素可通过多种途径降低外周组织对葡萄糖的摄 取和利用，如促进肝脏中的糖原异生，抑制胰岛素与其受体的结合，抑制葡萄 糖转运子一4向细胞膜的移位与锚着等。近年来的研究还表明糖皮质激素对胰岛 功能可能还存在损伤作用。此外，葡萄糖刺激后的胰岛素释放，也可因大量糖 皮质激素的存在而被抑制。但临床上发现皮质醇增高时，胰岛素分泌并未下降， 提示更复杂的机理参与了类固醇性糖尿病的发生。 过氧化物酶体增殖体激活受体(Peroxisome Proliferator Activatived Receptors，PPARs)属于II型核受体超家族中的一员。噻唑烷二酮类化合物 (Thiazol idinediones，TZDs)：吡格咧酮(Pioglitazone)、罗格咧酮 (Rosglitazone)等是PPAR Y的合成型配体，通过与PPAR y结合，发挥增加 肝脏和肌肉胰岛素敏感性的作用，可用于类固醇性糖尿病的治疗。Armando研究 小组在动物实验水平发现PPARs激动剂罗格咧酮和吡格咧酮的抗炎作用可被GR 拮抗剂RU486阻断，并于2005年通过细胞培养进一步发现TZDs可通过不依赖 于PPARs的途径激活糖皮质激素受体核转位而起到抗炎的作用，Lemberger等 摘要的研究表明糖皮质激素拮抗剂(RU486)可阻断糖皮质激素对PPAR 摘要 的研究表明糖皮质激素拮抗剂(RU486)可阻断糖皮质激素对PPAR Q的基因表 达的刺激作用，而PPAR Q在脂代谢中发挥重要作用。另有多项研究均可证明两 者在抗炎及促进脂肪细胞分化的作用途径中存在交互影响。而PPAR Y和GR同 属核受体家族，TZD的非PPARs依赖性对糖皮质激素的影响作用除了上述作用外， 是否有拮抗糖皮质激素对糖代谢影响的作用呢? 本研究采用地塞米松、吡格列酮与肝细胞株共同培养，了解地塞米松在细 胞水平对肝脏糖代谢和胰岛素生物效应的影响，并观察吡格列酮在该过程中能 否发挥拮抗作用，进一步明确地塞米松影响肝细胞糖代谢以及吡格列酮干预作 用的分子机制，为临床上预防和治疗类固醇性糖尿病提供了理论依据。 方法 1．HepG2细胞分为两组，对照组和地塞米松组(1umol／L)，并各设亚组，分别 温育24h，36h，48h， GOD-POD法测上清葡萄糖浓度，确定升高细胞葡萄糖 浓度最明显的地塞米松作用时间。 2．将HepG2细胞分为五组(I～V)，分别为对照组(未加药培养基)，地米 组(1umol／L)，地米+胰岛素组(胰岛素终浓度为10～01．L叫)，地米+吡格 列酮组(吡格列酮终浓度lOumol·L叫)，地米+胰岛素+吡格列酮组，．先加 地塞米松预先作用上述已确定的影响细胞葡萄糖浓度最明显的地塞米松作 用时间，各组再加入对应药物共同温育24h，观察吡格列酮在该条件下对糖 代谢糖原合成、糖异生及糖酵解各途径的干预作用。各项观察指标的测定： (糖原合成：糖原含量／蛋白含量(umol·mg叫)，糖异生：葡萄糖生成量／ 蛋白含量(umol·mg。1)，糖酵解：乳酸生成量／蛋白量(retool·mg。‘)和丙 酮酸激酶活力／蛋白量(mU·mg‘1))。 3．将HepG2细胞分为四组：对照组，地塞米松组，RU486组，地塞米松+RU486 组，上述四组细胞各设亚组，温育时间分别为24h，48h，GOD-POD法测上清 葡萄糖浓度以确定RU486阻断GR的最佳时间。再将HepG2细胞分为六组： 对照组，地米组，吡格列酮组，RU486组， RU486+地米组，RU486+nLt格列酮 组，共同温育上述已确定的RU486发挥作用的最佳时|’日J，用GOD-POD法测各 组细胞中葡萄糖浓度，观察PPAR Y和GR在肝细胞糖代谢之间是否存在交互 作用。 结果 1．地塞米松(浓度为l u tool／L)作用时间为48h时，较对照组细胞葡萄糖浓度 Il 摘要升高最明显(22．03±O．60阳16．67±0．47，K0．05)。 摘要 升高最明显(22．03±O．60阳16．67±0．47，K0．05)。 2．给予地塞米松作用后，地塞米松组较对照组细胞葡萄糖浓度明显升高(22．03 ±0．60陋16．67±0．47，PO．05)，糖原含量明显下降(6．3