薄层色谱及其在药物分宿析的应用.ppt

薄层色谱及其在药物分析中的应用 1薄层色谱（Thin liner chromatography,TLC）概况 1.1薄层色谱分类 1.1.1按机理分类：吸附薄层，分配薄层，离子交换薄层，凝胶薄层 1.1.2按分离效能：经典薄层，高效薄层（HPTLC） 1.2.薄层色谱的特点 1.2.1.设备简单，操作方便，快速。 1.2.2.与纸色谱比较，斑点扩散少，检出灵敏度高10～100倍。 1.2.3.可以使用腐蚀性显色剂，如浓硫酸，浓盐酸等。 1.2.4.可以同时分析多个样品，无交叉污染。 1.2.5.流动相选择范围大。 1.2.6.为一次性板，对前处理要求不高。 薄层色谱与高效液相色谱方法比较（1） 薄层色谱与高效液相色谱方法比较（2） 2.薄层色谱吸附剂 2.1硅胶（Silica ge）：具有表面活性，略带酸性。硅胶G, 硅胶H,硅胶GF254 2.2氧化铝（Aluminum oxide）：具有表面活性，略带碱性（pH8～10）；酸性（pH4）；中性（pH7～7.5） 2.3纤维素(Cellulose)：是一种天然多糖类，，主要用于液-液分配薄层色谱担体，其固定液一般就是从环境中吸附的水，通常不需加黏结剂。 纤维素匀浆的配制：纤维素与水以1：5～6的比例混合均匀，即可涂布。纤维素薄层干燥后的厚度只有涂布厚度的一半， 2.4硅藻土(Diatomaceous) ：中性吸附剂，主要用于分配薄层色谱中的担体。主要成分使硅胶。用时需要纯化。 2.5葡聚糖凝胶（Sephadex）： 铺板：以适量溶剂，如水、二甲亚砜或乙二醇进行溶胀，薄层厚度0.4～1.0mm。配制参数见下表： 葡聚糖凝胶配制参数 2薄层吸附剂 2.6聚酰胺：属有机薄层材料，常用的时聚己内酰胺（聚酰胺6）和聚十一酰胺（聚酰胺11）适合分离含酚羟基、羧基、氨基酸等结构和基团的化合物，选择性较高。 聚酰胺板制备：16g聚酰胺粉末与65ml蒸馏水，充分振动；或16g聚酰胺粉末与65ml甲醇混匀。薄层板于室温下干燥。 注意： A刚涂布的薄层板不能立即活化。 B不是活度越高越好。如硅胶板当含水量为0时，活度太强。反之，当硅胶含水高于17%，氧化铝含水高于6%时，则活性太低，分离效率低。下表是活性级别与含水量的关系。 活性级别与含水量的关系 吸附剂选择原则 6.1.1酸性物质一般用酸性或中性，如硅胶，酸性或中性氧化铝。 6.1.2极性大的物质用低活性吸附剂，反之，则用高活性吸附剂。 6.1.3常用的吸附剂吸附强弱顺序：硅胶》氧化铝》硅藻土（适合分离极性物质） 3.载板 3.1.载板要求： 化学惰性 一定的强度 表面光滑、平整 厚度均匀 价格便宜 3.载板 3.2.载板种类： 玻璃板 聚酯箔 铝箔 3.3.薄层预制板 4薄层色谱点样 点样的一般要求：溶剂、点样量、点样器、原点大小 4.1手工点样：定容毛细管（1μl～5μl） Camag Co , Drummond Scentifin Co 4.2自动点样：手工点样缺点：精度差，时间长，不易操作。 喷样仪：Camag公司生产，为条带状喷样系统，基本实现自动化。 优点：适合于较大量稀样品溶液的喷加，通过加大点样量降低了检测限。 条状色谱图更方便于狭逢式扫描，系统误差小。 自动点样仪：Camag生产，是一种适合定量分析的全自动点样仪，液既可以点点状斑点，也可以点条状斑点。 5薄层色谱的展开 5.1多次展开：目的是增加有效分离距离。经多次展开后的Rf值可由下式计算： Rfn=1-(1-Rf)n 5.2分步展开：几种展开剂从低极性到高极性依次展开。 5.3连续展开：使流动相沿薄层连续流动。目的是增加有效分离距离。由于没有展开前沿，故需对照物做参照。 5.4二维展开：沿2个垂直的方向分别展开。方法：将被分离的样品点于薄层板的一个角上，展开到一定距离后，将薄层板取出，挥干溶剂，再将薄层板沿原方向垂直方向展开。 5.5离心展开：大大提高分离速度，用于制备色谱。 5.6梯度洗脱展开和梯度薄层 5.7多维展开、加压展开、控温展开 薄层色谱的展开 6.展开剂选择 关于溶剂系统的选择和分类方法：溶剂强度法、三角优化法、均匀设计等 基本原则：相似相溶原则；由简到繁，由单元到多元。 6.1展开剂选择要点 6.1.1增加溶剂强度，使Rf值增大，但可能降低分离能力，反之亦然。 6.1.2若展开剂中较强组分得体积比小于5%或大于50%，选择性是最大的有利于溶质与展开剂组分的选择性相互作用。 6.1.3用乙醚或甲醇代替展开剂中的一种较强组分，可由于