谷氨酸发酵机制以与杂菌噬菌体防治.pptVIP

谷氨酸发酵机制 一、谷氨酸合成途径 二、葡萄糖发酵谷氨酸的理想途径 三、细胞膜通透性的调节 四、谷氨酸生产菌的特征和种类 一、谷氨酸合成途径 糖酵解途径（EMP途径） 磷酸戊糖途径（HMP途径） 三羧酸循环 乙醛酸循环 丙酮酸羧化支路（CO2固定反应） 谷氨酸发酵的代谢途径 生成的丙酮酸，一部分在丙酮酸脱氢酶系的作用下氧化脱羧生成乙酰CoA，另一部分经CO2固定反应生成草酰乙酸或苹果酸. 草酰乙酸与乙酰CoA在柠檬酸合成酶催化作用下，缩合成柠檬酸，进入三羧酸循环，柠檬酸在顺乌头酸酶的作用下生成异柠檬酸，异柠檬酸再在异柠檬酸脱氢酶的作用下生成α-酮戊二酸，α-酮戊二酸是谷氨酸合成的直接前体。 α-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶作用下经还原氨基化反应生成谷氨酸 谷氨酸 脱氢酶 合成酶 Glc 丙酮酸 草酰乙酸 CO2 天冬氨酸（Asp） 乙酰-coA CO2 羧化酶 柠檬酸 顺乌头酸 异柠檬酸 α-酮戊二酸 Glu 反馈抑制 异柠檬酸 脱氢酶 反馈阻遏 优先合成 谷氨酸生物合成调节机制 α-酮戊二酸脱氢酶 优先合成 谷氨酸比天冬氨酸优先合成，谷氨酸合成过量后，就会抑制和阻遏自身的合成途径，使代谢转向合成天冬氨酸 柠檬酸合成酶的调节 柠檬酸合成酶是三羧酸循环的关键酶，除受能荷调节外，还受谷氨酸的反馈阻遏和顺乌头酸的反馈抑制，谷氨酸合成过量时，代谢转向天冬氨酸的合成。 优先合成与反馈调节 α-酮戊二酸脱氢酶的调节 在谷氨酸产生菌中，α-酮戊二酸脱氢酶活性微弱，使α-酮戊二酸不能继续氧化。 谷氨酸脱氢酶的调节 谷氨酸对谷氨酸脱氢酶存在着反馈抑制和反馈阻遏 α-酮戊二酸合成后由于α-酮戊二酸脱氢酶活性微弱，谷氨酸脱氢酶的活力很强，故优先合成谷氨酸 控制谷氨酸合成的重要措施 丙酮酸羧化酶 柠檬酸合成酶 作用生成柠檬酸 乙醛酸循环基本不发生 一柠檬酸脱氢酶作用 α-酮戊二酸氧化能力缺失或微弱 谷氨酸脱氢酶 能力强 细胞膜通透性强 二、细胞膜通透性的调节 对谷氨酸发酵的重要性：当细胞膜转变为有利于谷氨酸向膜外渗透的方式，谷氨酸才能不断地排出细胞外，这样既有利于细胞内谷氨酸合成反应的优先性、连续性，也有利于谷氨酸在胞外的积累。 细胞膜是在细胞壁与细胞质之间的一层柔软而富有弹性的半渗透性膜，磷脂双分子层为其基本结构，在双分子层中镶嵌蛋白质。 一种是通过控制脂肪酸和甘油的合成，实现对磷脂合成的控制，使得细胞不能形成完整的细胞膜； 一种是通过干扰细菌细胞壁的形成，使得细胞不能形成完整的细胞壁，丧失了对细胞膜的保护作用。在膜内外渗透压差等因素影响下，细胞膜物理性损伤，增大膜的通透性。 根据细胞膜的结构特性，控制细胞膜通透性的方法主要有两种： 1．控制细胞膜的形成 1、利用生物素缺陷型菌株进行谷氨酸发酵时，限制发酵培养基中生物素的浓度。 生物素是催化脂肪酸合成起始反应的关键酶乙酰CoA羧化酶的辅酶，对脂肪酸的形成起促进作用，进而影响了磷脂的合成和细胞膜的形成。 选育生物素缺陷型菌株，阻断生物素合成，亚适量控制生物素添加，抑制不饱和脂肪酸的合成，使得细胞膜不完整，提高了细胞膜对谷氨酸的通透性。 2、利用生物素过量的糖蜜原料进行谷氨酸发酵时，添加表面活性剂或饱和脂肪酸。 在生物素过量的条件下，添加表面活性剂或饱和脂肪酸仍能进行谷氨酸发酵，其原因在于这些物质对生物素起拮抗作用，抑制不饱和脂肪酸的合成，导致油酸合成量减少，磷脂合成不足，使得细胞膜不完整，提高了细胞膜对谷氨酸的通透性。常用的表面活性剂有吐温-60、吐温-40等。常用的饱和脂肪酸有十七烷酸、硬脂酸等。 3、利用油酸缺陷型菌株进行谷氨酸发酵，限制发酵培养基油酸的浓度。 油酸缺陷型菌株丧失了自身合成油酸的能力，直接影响磷脂的合成，不能形成完整细胞膜，必须添加油酸才能生长，所以通过控制油酸的添加量，实现细胞膜对谷氨酸的通透性。 当油酸过量时，该菌株只长菌或产酸少；当油酸亚适量时，随着油酸的耗尽，细胞膜结构与功能发生变化，使得谷氨酸的通透性提高。 一种脂肪酸。 分子式C18H34O2 甘油缺陷型菌株不能自身合成α-–磷酸甘油和磷脂，外界供给甘油才能使其生长，因此可以通过控制甘油添加量来控制细胞膜对谷氨酸的通透性。 当甘油添加量过多时，磷脂正常合成，菌体正常生长，不产酸或产酸低； 当甘油添加量过少时，菌体生长不好，产酸低，所以控制甘油亚适量是控制的关键。 4、利用甘油缺陷型菌株进行谷氨酸发酵，限制发酵培养基甘油的浓度。 5、利用温度敏感突变株控制细胞膜的生物合成 温度敏感突变株的突变位置是发生在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构的基因上，发生碱基的转换或颠换，一个碱基为另一个碱基所置换。这样，该基因所指