基于前列腺癌蛋白质组学研究筛选出的Periostin在前列腺癌中的表达及功能研究-外科学(泌尿科)专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 复旦大学博士研究生论文中文摘要 复旦大学博士研究生论文 中文摘要 第一部分前列腺癌差异蛋白质组学研究 目的：通过同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)为基础的蛋白质组学研究筛 选出前列腺癌发生、发展过程中相关的差异表达蛋白以便发现前列腺癌的相关生 物标记物，并对这些差异表达蛋白进行生物信息学分析，了解这些蛋白的功能与 调控情况。 材料和方法：将前列腺穿刺活检的组织标本经病理医师切片诊断后分为3组：良 性前列腺增生组(n=20)、前列腺癌组(n=20例)以及前列腺上皮内瘤组(n=10)。 然后对这些组织标本进行蛋白提取、定量和酶解。iTRAQ试剂标记后(其中114 标记良性前列腺增生组，116标记前列腺癌组，117标记前列腺上皮内瘤组)，进 行二维液相色谱．串联质谱(2DLC．MS／MS)分析。利用ProteinPilot软件(版本3．O) 对MS／MS肽段进行分析，在International Swissprot(0902 1 0，human)数据库中搜 寻蛋白并定量。116：114或116：117差异表达蛋白界值设定：大于1．5倍或小于 O．66倍(P0．05)认为二者之间存在显著差异表达。相对于良性前列腺增生，前列 腺癌的差异表达蛋白(即116：114的差异表达蛋白)在本研究重点被探讨。我们对 前列腺癌的差异表达蛋白Tumor protein D52(癌蛋白D52，TPD52)、Prohibifin-2(抑 制素．2)、Elongation factor Tu(延伸因子Tu，EF．Tu)及Decorin(核心蛋白多糖)进行 了Western-blot验证。然后我们应用MetaCore(OeneGo)软件对差异表达蛋白进行 生物信息学分析，包括GO分析、转录调控网络和转录因子网络分析。 结果：从International Swissprot(090210，human)数据库中总共鉴定出760种蛋白。 在这些鉴定的蛋白中，PSA(前列腺特异抗原)和PAP(前列腺酸性磷酸酶)是已知的 而且已经广泛用于临床的两个生物标记物。基于筛选差异表达蛋白的条件，相对 于良性前列腺增生，前列腺癌差异表达蛋白共有46个，其中20个蛋白明显上调， 26个蛋白明显下调。在这些差异表达蛋白中，诸如线粒体相关蛋白、细胞外基质 蛋白等已被证实在前列腺癌发生、发展中发挥重要作用。在我们鉴定的差异表达 白中，TPD52、Prohibitin-2、EF．Tu在前列腺癌中分别上调4．25倍、4．57倍和3．02 倍，而Decorin下调0．43倍。Western．blot结果显示相对于良性前列腺增生组织， TPD52、EF．Tu以及Prohibitin-2在前列腺癌中明显高表达(P0．05)，相反，相比前 列腺癌组织，Decorin在良性前列腺增生组织中高表达(Po．05)。Westem-blot结果 与这些差异表达蛋白的变化相符合。而差异表达蛋I兰tPefiostin将作为我们的兴趣 蛋白，在本论文的第二部分重点被探讨。根据GO数据库，我们按差异表达蛋白 的富集度进行排序，挑选出了前10位的亚细胞定位、分子功能和生物过程。结果 提示差异表达蛋白大部分定位于细胞外区域，发挥连接功能而且涉及平滑肌生物 过程、细胞骨架的组装、抗凋亡、细胞粘附等生物过程。此外，我们按差异表达 复旦大学博士研究生论文蛋白的富集度进行排序，挑选出了前 复旦大学博士研究生论文 蛋白的富集度进行排序，挑选出了前5位的转录调控网络分别由SPl、p53、YYl、 Androgen receptor(雄激素受体，AR)以及c．Myc调控，处于第1位的转录因子网络 为以Slug为核心的调控相关网络。这些转录因子参与差异表达蛋白的调控，涉及 抗凋亡、细胞粘附调控、细胞周期调控等生物过程。 结论：iTRAQ技术为我们从整体上了解在前列腺癌发生、发展过程中蛋白质的 表达差异，从而筛选出有意义的生物标记物提供了一个良好的平台。本研究通过 iTRAQ技术分析得到的前列腺癌差异表达蛋白可靠，并且揭示了线粒体相关蛋 白以及细胞外基质蛋白在前列腺癌发生、发展中的作用。生物信息学的研究方法 可以拓展我们的思路和视野，有助于我们进一步从整体上了解差异表达蛋白的功 能和调控。本研究通过生物信息学分析得到的调控差异表达蛋白的转录因子 SPl、p53、YYl、AFt、c-Mye以及Slug参与调控前列腺癌的发生、发展过程中 的诸多生物过程。 关键词：前列腺癌：蛋白质组学；生物信息学；nRAQ 第二部分Periostin在前列腺癌中的表达及功能研究 目的：探讨Pcriostin在前列腺癌组织和前列腺癌细胞中的表达。进一步以前列腺 癌LNCap细胞系为研究对象，观察通过R