压力诱导c57bl6小是鼠胃炎分子机制研究.docx

CONTENTSAbstract(Chinese) CONTENTS Abstract(Chinese) ．1 Abstrac“EⅡgIish) ．4 Symbolic description ．．7 Introduction ¨9 Materials and Methods ．．16 1．Materials ． 2．Methods 21 ResuIts ．． Discussion 34 Conclusion ．．37 Figures ． ．．38 References 45 Acknowledgements 51 Research paper during the period of studying ．53 万方数据 山东大学硕士学位论文压力诱导C57BL／6小鼠胃炎分子机制研究 山东大学硕士学位论文 压力诱导C57BL／6小鼠胃炎分子机制研究 专 业： 病原生物学 硕士研究生： 韩英男 导 师： 孙允东副教授 中文摘要 背景与目的 胃炎是由不同病因导致的胃黏膜炎性病变，是常见的严重影响人民健康的疾 病之一。研究发现应激对胃炎的发生发展有很重要的促进作用，随着社会变化节 奏的加快及各种竞争的加剧，人们所承受的压力等精神应激也越来越大，但是目 前对应激性胃炎发生的分子机制尚不完全明确，有关其与胃部菌群的具体关系和 分子机制尚需进一步的探究。 持续的压力会破坏机体内稳态环境(homeostasis)，例如诱导免疫紊乱、消 化道菌群失调等，从而直接威胁身体健康导致各种疾病，如抑郁症、心脏病、消 化性溃疡甚至癌症等。人胃黏膜内定居着200多种的细菌，当机体受到某些内因 或外因的刺激时，可引起胃肠道菌群的结构、定位、数量、比例和代谢特征等的 变化，进而导致疾病的发生，但是目前有关应激性胃炎发生机制与菌群的关系未 见具体报道。 众所周知机体的先天性免疫系统特别是模式识别受体(pattern-recogllition receptors，PRRs)在维护消化道菌群稳态过程具有重要作用，虽然正常菌群对维持 宿主生理功能具有重要的作用，但是宿主仍对其保持警戒，以保持菌群生态结构 的稳定，而免疫系统的过度警戒或者警戒不足均会导致菌群失调，即免疫稳态 (homeostasis)影响消化道菌群稳定，因此PRRs的表达水平会影响菌群的稳定。 NLRPl是一种模式识别受体，又被称作炎性小体(Inflammasome)，由胞浆内 PRRs参与组装而成一种多蛋白复合体，是固有免疫系统的重要组成。炎症小体 能够识别病原相关分子模式(pathogen—associated molecular patterns，PAMPs)或者 宿主来源的危险信号分子(damage—associated molecular patterns，DAMPs)，招募 和激活促炎症蛋白酶Caspase—l。活化后的Caspase．1进而裂解IL一1B和IL一18的 万方数据 山东大学硕士学位论文前体pro—IL一113和pro-IL一18，产生成熟的细胞因子IL一1B和IL一18。目前已确定多 山东大学硕士学位论文 前体pro—IL一113和pro-IL一18，产生成熟的细胞因子IL一1B和IL一18。目前已确定多 种炎性小体参与的针对多种病原体的宿主防御反应，NLRPl普遍存在于绝大多 数哺乳动物的免疫系统中，在小鼠中有三个同源基因(NLRPla，b,c)，其中只有 NLRPlb能够被细菌毒素诱导表达组成炎性小体。但是目前尚未见NLRPlb在应 激性胃炎发病过程中作用的报道。 最近的研究表明硫化氢(Hydrogen Sulfide，H2S)在维持肠道菌群稳定过程 中发挥重要作用。H2S是一种重要的气体信号分子，主要通过胱硫醚一fj一合成酶 (cystathionine—D—synthase，CBS)与胱硫醚．丫一裂解酶(cystathionine-7．1yase，CSE) 两种酶经L-半胱氨酸(L-cysteine)代谢合成。H2S从多方面影响胃肠道的功能， H2S可以促进粘膜防御、加速消化道溃疡的愈合以及缓解炎症反应，并有研究表 明H2s对压力诱导的急性胃溃疡具有明显保护。综合以上信息我们推测H2S在 维持胃内菌群平衡中具有重要作用。本论文通过建立小鼠应激性胃炎模型，研究 应激性胃炎发生过程中，胃部菌群、模式识别受体及H2S之间的联系及其作用， 以期为应激性胃炎的发病机制提供系统的解释及新的治疗思路。 材料与方法 本研究所用SPF级C57BL／6雄性实验小鼠购自北京华阜康生物科技股份有 限公司，通过恐水试验Water—avoid Sress(WAS)建立小鼠应激性胃炎模型。通 过16SrRNA测序技术检Nd,鼠胃部菌群的种类。采用Real．time PCR技术、酶联 免疫吸附实