基因工程石——重点.docVIP

基因工程大纲——高国辉老师部分 名解： 第一代基因工程（重组DNA）：是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则是涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 第二代基因工程（蛋白质工程）：研究蛋白质的结构及结构与功能的关系，然后人为地设计一个新蛋白质，并按这个设计的蛋白质结构去改变其基因结构，从而产生新的蛋白质;或者从蛋白质结构与功能的关系出发，定向地改造天然蛋白质的结构，特别是对功能基因的修饰，也可以制造新型的蛋白质。 第三代基因工程（途径工程）：是多基因的基因工程。通过基因工程的手段来改变分叉代谢途径的流向或阻断有害代谢产物的合成等原理，来改变微生物代谢的流向，增加某些产物的产量，也可通过引入外源基因来延伸原来的代谢途径，产生新的末端代谢产物，或者利用新底物作为生物合成的原料，也可以通过构建新的代谢途径合成具有新化学结构的代谢产物。 质粒：是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。 考斯质粒（cosmid）：是一类人工构建的含有λ-DNAcos序列和质粒复制子的特殊类型的载体。 克隆质粒：常用于克隆和扩增外源基因。它们或者含有氯霉素可扩增的松弛型复制子的结构，或者复制子经过人工诱变，解除对质粒拷贝数的负控制作用，使得质粒在每个细胞中可达数千个复制拷贝。 穿梭质粒：这类质粒分子上含有两个亲缘关系不同的复制子结构以及相应的选择性标记基因，可以在两种不同种属的受体细胞中复制并检测。 表达质粒：这类质粒在多克隆位点的上游和下游分别装有两套转录效率较高的启动子，合适的核糖体结合位点（SD序列）以及强有力的终止子结构，使得克隆在合适位点上的任何外源基因均能在受体细胞中高效的表达。 限制性核酸内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种HYPERLINK /view/3851484.htm内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。 Klenow酶：用枯草芽孢杆菌蛋白酶处理切掉大肠杆菌DNA聚合酶ⅠN端的5→3外切酶活性部分。 T4DNA连接酶：由T4噬菌体基因编码，相对分子质量为60KD。可以用来修复DNA双链上的单链缺口，连接RNA-DNA杂交双链上的DNA链缺口或RNA链缺口，也可以用来连接完全断开的两个平头双链DNA分子。 动物的转基因技术：利用转基因的重组子构建技术，重组分子导入动物体内的转化技术，转基因在受体细胞染色体上的稳定整合及可控制性表达技术统称为转基因技术。 转基因动物：指以实验方法导入外源基因，在染色体组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 共抑制效应：当受体细胞染色体上含有转基因的同源伙伴时，转基因与内源性同源基因的表达将同时受到抑制。 基因治疗：是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的HYPERLINK /view/23833.htm受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。 Ti的共整合转化：T-DNA 在大肠杆菌质粒上，含有E.coli的选择标记和植物选择标记Kmr。首先在E.coli中筛选重组分子，然后将重组质粒转化到农杆菌中，质粒与Ti质粒上的同源序列发生同源重组，将外源基因整合到Ti质粒上，用于侵染植物细胞。T-DNA 重组分子整合到植物细胞染色体DNA 上，Kmr筛选转化细胞。 Ti质粒的二元整合转化系统:即穿梭质粒。插入外源基因的重组穿梭质粒直接转化含有Ti质粒的根瘤农杆菌，经筛选后直接感染植物细胞。农杆菌侵染植物细胞后，植物的创伤信号启动Ti质粒上的Vir基因，随后将穿梭质粒的T-DNA 切割下来，转移到植物细胞中。（与共整合系统所不同的是，含外源基因的质粒可在农杆菌内自主复制并保留下来。） 问答、填空、选择： 基因工程绪论（过程、原理、三大要素有一个大题） 1、基因工程的三大要素：供体、受体、载体。 2、基因工程的基本过程：切，接，转，增，检。 （1）基因的剪刀（切）——限制性内切酶： 　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。 DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。 连——DNA连接酶： 连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 转——运载体： 运载体必须同时满足三个要求： ①能与目的基因结合；②能进入受体