第六章基因先工程疫苗.ppt

以马立克CVI988/Rispens 为例，简述细胞苗生产工艺 细胞制作 1、选择孵育10天、发育良好的SPF鸡胚； 2、胚体去头及内脏； 3、加入胰蛋白酶，采取磁力搅拌的方法将鸡胚组织消化成单个的细胞； 4、冷冻离心后，取细胞； 5、将细胞加入培养液(进口试剂)，制成细胞悬液(加入进口血清)； 6、将细胞悬液加入转瓶，置37℃培养； 工艺介绍 接毒 1、细胞经37℃培养24小时，即可长成细胞单层； 2、将种毒接入细胞单层（必要时需吸附30分钟左右）； 3、加入培养液，置37℃培养。 收获 1、含毒细胞经培养60-72小时，病变达80%以上时即可收获； 2、将转瓶中培养液弃去； 3、加入胰酶-EDTA消化液（使细胞间结构疏松），将细胞单层消化成单个细胞； 4、加入停消液终止消化； 5、冷冻离心后取细胞，用冻存液悬浮。 工艺介绍 工艺介绍 分装、冻存 1、使用进口分装机，将含毒细胞的冻存液准确地分入安瓿瓶（悬液瓶置于磁力搅拌器上，确保均匀），装夹； 2、将安瓿瓶放入液氮程序降温仪，采取特殊工艺使其降温至-70℃； 3、将安瓿（夹）移入液氮（-196℃）保存。 从美国CBS公司引进程序降温仪 液氮苗存放间全景 以新城疫活疫苗（ZM10） 为例简述组织苗生产工艺 1、种毒选择 必须选择SPF蛋制作种毒； 种毒分为原始种毒、基础种毒、种毒批； 胚体符合新城疫典型特征：头、肢、腹有出血点；心脏肿大，心尖有出点；胚液HA达512以上； 效价达108.5EID50/0.1ml； 无细菌、霉菌、支原体和外源病毒。 2、选择鸡胚 必须选择SPF蛋； 产蛋日龄最好控制在２６周～５６周内； 尽量采购３天以内的新鲜种蛋，最迟不超过七天； 种蛋产出后４小时内进行熏蒸消毒，种蛋在１４～１８℃，相对湿度６５％左右最适； 单枚蛋重４８～６０g之间，鸡蛋大小均匀一致； 蛋壳质量：应选择表面致密，钙质分布均匀的种蛋，剔除沙壳，畸形，破壳及表面不清洁的种蛋．操作时要轻拿轻放； 入孵前进行熏蒸消毒； 孵化温度３７．５～３８．５℃，相对湿度５５～７０％；翻蛋次数一次／２小时； 孵化至５～７日龄须照蛋，剔除不受精和死胚； 孵化至10日龄备用。 3、接种种毒 将种毒作数万倍稀释； 通过自动接种机，将种毒由鸡胚气室部位接入到尿囊腔内； 用胶液将接种孔封闭； 后孵化：温度36.5-37℃，相对湿度在60%左右； 后孵化不翻蛋。 4、收获 将后孵至72-96小时的鸡胚置4℃冷却6小时； 检查胚体是否符合新城疫典型特征：头、肢、腹有出血点；心脏肿大，心尖有出点；胚液HA达512以上； 通过自动收获机收获鸡胚的尿囊液； 收获的尿液经病毒浓缩设备进行4-10倍浓缩（产品的均一与稳定）； 浓缩抗原再经除菌设备进行除菌。 5、中间检测 效价检测：抗原效价必须达08.5EID50/0.1ml×浓缩倍数。 无细菌、霉菌、支原体和外源病毒。 6、配苗、分装、冻干、轧盖、贴标 根据浓缩倍数、检测的效价和设计羽份确定配苗比例，以期产品的均一与稳定； 用自动分装机进行定量分装（半加塞）； 进入冻干机进行程序冻干（自由水和结合水）； 冻干结束后，进行轧盖、贴标（先确定羽份）、包装（即时包装）。 7、成品检验 物理性状检测 剩余水分测定 无菌检验 支原体检验 鉴别检验 安全检验 效力检验 真空度检测 耐老化检验 外源病毒检验 第四节 疫苗生产工艺流程 菌（毒）种 培养物（培养基、动 物、禽胚或细胞等） 收获抗原（培养 液、含毒组织、胚液或细胞液等） 配苗 分装 冻干成活疫苗或灭活后制成灭 活疫苗。 病毒性细胞疫苗的制造工艺流程 健康动物（或胚胎） 组织 原料 细胞悬液 生长细胞 病毒液 配苗 分装冻干、扎盖帖签 活疫苗 基础种毒 生产用种毒 原料 保护剂 配制 灭菌 细胞培养液 传代细胞 灭活病毒液 配苗（混匀、乳化） 分扎盖帖签装 灭活疫苗 检验 原料 佐剂 配制 灭菌 灭活 检验 配制 培养收获 病毒性组织疫苗的制造工艺流程 感染动物或胚胎 分装、扎盖、贴签 健康动物或SPF鸡胚等 健康动物或SPF鸡胚等 动物或SPF鸡胚等 基础种毒 生产用种毒 收获感染组织或胚液 纯化配制成含毒悬液 配苗 分装冻干 活疫苗 保护剂 原料 配制 检验 灭活病毒液 配苗、乳化 灭活疫苗 原料 佐剂 配制 灭活 检验 十万级洁净走道 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 工艺介绍 德国引进R921全自动安瓿灌封机 10万级净化条件下的鸡胚前孵化厂房(3) 美国引进MILLIPORE病毒浓缩器 重组多价活疫苗，亚单位联合疫苗 联合