第六章三蛋白质合成.ppt

密码子的识别仅决定于反密码子，而与氨基酸无关 通过还原脱硫反应，使Cys-tRNA 转变为Ala-tRNACys； 这一转变没有影响密码子-反密码子之间的特异性结合，使Ala掺入到蛋白中愿本是Cys的位置。 二、氨基酸的激活 AA + ATP AA-AMP + PPi AA-tRNA + AMP 氨基酸与tRNA结合形成氨酰-tRNA，反应在细胞质进行。 tRNA 氨酰-tRNA 合成酶 氨酰-tRNA 合成酶 基本反应： 至少有20种氨酰-tRNA合成酶（aminoacyl-tRNA synthetase） 氨酰-tRNA 第三节 核糖体（ribosome） 蛋白质合成的场所，由几种RNA和几十种蛋白质组成。真核生物中在细胞质中合成蛋白质。 最适条件下，合成一条含400个氨基酸残基的多肽（～40 kD）约需10 秒。 一、核糖体的结构 真、原核生物中均由大、小两个亚基组成，各亚基均含有RNA，称为核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）和多种蛋白质。 E. coli 核糖体各种蛋白组分的表示： 小亚基：S1-S21 大亚基：L1-L34 核糖体基本结构 核糖体的大小 核糖体内的 A 位点和 P 位点 P 位点 A 位点 多肽出口 A 位点 P 位点 E 位点 G 因子位点 （一）小亚基 RNA与蛋白质不对称分布，与大亚基的界面处几乎全是RNA；L7/L12位于界面处。 大亚基和小亚基的三维结构 核糖体的三种形式： 核糖体、核糖体亚基、多核糖体（polyribosome / polysome） 核糖体进行周期性的解离-聚合 多核糖体结构：两个连续核糖体中心之间距离约为80～90 N； 起始快于延伸和终止，则核糖体密集，反之则稀疏。 转录与翻译同时进行，mRNA 快速降解。 核糖体沿 mRNA 的5’ 3’方向移动 多核糖体（polysome）电镜照片 二、rRNA rRNA的功能： 起始阶段，16S rRNA 3’ 端与 mRNA 直接相互作用； 16S rRNA 直接与 A、P 位点的 tRNA 反密码子作用； 23S rRNA 则与 A、P 位点的肽酰-tRNA 的CCA 末端作用； 16S、23S 均参与亚基间的相互作用。 mRNA互补区 A位点结合区 P位点结合区 16S rRNA 全长1542 N（E. coli）； 有多个甲基化位点，其中有些参与mRNA与tRNA识别； 与50S、mRNA、tRNA结合时，16S rRNA的结构会发生变化。 肽酰转移酶中心 移位 延伸 GTP酶中心 23S rRNA的二级结构 5S rRNA的二级结构 一、N-甲酰甲硫氨酸 所有细菌蛋白质合成的第一个氨基酸都是N-甲酰甲硫氨酸（fMet）。 两种tRNAMet：tRNAfMet，tRNAmMet；只有tRNAfMet上的氨基酸可以甲酰化； 合成： Met-tRNAfMet fMet-tRNAfMet 转甲酰酶 N10-甲酰四氢叶酸 第四节 蛋白质合成的起始 由于没有游离的氨基，不能插入到肽链内部。 P A NH2 CHO AA AA AA C=O O 由于没有游离的氨基，不能插入到肽链内部。 x 所有tRNA受体臂最后一对碱基中，只有tRNAfMet 的没有配对； 而使 tRNAfMet 的配对后，tRNAfMet 可参与延长； 甲酰化有同样的功能； tRNAfMet 反密码臂上有一系列G-C 对，可使fMet-tRNAf 直接插入P 位点。 起始从30S 亚基、fMet-tRNAfMet、和一个mRNA分子的复合物开始； 然后加入50S 亚基，形成70S 核糖体; 只有fMet-tRNAf可被30S 亚基用于起始； 只有其它氨酰-tRNA可被70S核糖体用于延长。 起始密码子AUG上游约10 bp处有一段 5′ ... A G G A G G ... 3′ 序列，称为S-D序列 (Shine-Dalgarno序列)， 与16S RNA 3′的 3′ ... U C C U C C ... 5′ 互补。 二、起始密码子的正确选读 多基因mRNA中，核糖体可分别结合在各基因起点以起始合成。 三、起始因子(IF) 蛋白质合成的启动必须有起始因子参加，形成核糖体- mRNA- tRNA三元复合物。 起始因子：蛋白质合成起始阶段特异地与小亚基结合的蛋白质。 (Initiation factor) IF-3 为30S特异地结合在mRNA起始位点所需； IF-2 结合于起始tRNA，控制其进入核糖体； IF-1 作为起始复合体一稳定因子，没有专一功能，只能促进IF-2 及 IF-3 的活性，有些原核生物无IF-I。