人小涎腺间充质干细胞和上皮干祖细胞分离鉴定及其构建生物工程化唾液腺类器官的研究-外科学专业论文.pdf.docxVIP

学校代码：10023学 学校代码：10023 学 号：B2012004003 博士学位论文 人小涎腺间充质干细胞和上皮干／祖细胞分离鉴定 及其构建生物工程化唾液腺类器官的研究 Isolation and Characterization of Adult Stem Cells Harboring in Human Minor Salivary Glands and Study on Generation of Bioengineered Salivary Gland Organoids 所 院 整形外科医院 姓 名 吕磷 指导教师： 赵振民教授 导师小组： 赵振民 尹宁北 张智勇 学科专业： 外科学 研究方向： 整形外科与再生医学 完成日期： 201 5年4月 万方数据 万方数据 万方数据 目 目 录 英文缩略词表 i 中文摘要 。3 英文摘要 6 第1章 前言 9 1．1 涎腺来源干／祖细胞研究进展 ．9 1．2 口干症与细胞治疗 ．．12 1．3 本研究的设想与意义 1 3 第2章 人小涎腺间充质干细胞的分离与鉴定 14 2．1 人小涎腺间充质干细胞体外培养 ．．1 5 2．2 人小涎腺间充质干细胞多向分化潜能的鉴定 ．．29 2．3 基因表达谱比较分析人小涎腺间充质干细胞与其他组织来源MSC 43 第3章 人小涎腺上皮来源干／祖细胞体外立体培养的研究 ．57 3．1 人小涎腺上皮来源干细胞分离培养 58 3．2 体外立体培养方法对小涎腺上皮来源干细胞的影响 ．69 第4章 构建生物工程化唾液腺类器官初步研究 76 4．1 hMSGMSCs与hMSGSCs体外共培养构建唾液腺类器官 ¨77 4．2 唾液腺类器官在动物体内转归的初步探究 ．91 第5章 全文总结 ．．95 附录RT—PCR引物序列 ～96 筠{述 ．97 全文参考文献 1 01 致谢 。1 07 个人简介 ．109 独创性声明 1 I 1 万方数据 万方数据 北_i协和医学院博上学位论文英文缩略词 北_i协和医学院博上学位论文 英文缩略词 缩写 英文全称 BHA Butylated Hydroxyanisole BMP Bone Morphogenetic Protein Brdu Bromodeoxyufidine BSA Bovine Serum Albumin CM．Dil Chloromehyl-Benzamido Dialkylcarbocyanine DAB Diaminobenzidine DAPI 4,6··diamidino··2·-phenylindole ECM Extracellular Matrix FBS Fetal Bovin Serum G『FP Green fluorescent protein hASCs human Adipose—derived Mesenchymal Stem Cells hBMSCs human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells hESCs human Embryonic Stem Cells hMSGMSCS huamn Minor Salivary Gland Mesenchymal Stem Cells hMSGSCs human Minor Salivary Gland Stem Cells hTERT human Telomerase Reverse Transcriptase IBMX 3-isobutyl一1一methylxantlline ITS Insulin+Transferrin+Sodium selenite MTT 3一(4，5一dimethylthiazol一2-y1)·2，5-diphenyltetrazolium bromide OD Optical Density PBS Phosphate Buffered Saline I疆P Red fluorescent protein RIN RNA2 Integrity Number RT—PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction SFR Saliva Flow Rate 2 北京协和医学院博士学位论文中文摘要 北京协和医学院博士学位论文 中文摘要 研究背景及意义 再生医学的理念为口干症的治疗提供了新的思路，其中种子细胞的获得和唾液 腺功能重塑是关键环节。小涎腺具有与大涎腺相似的结构与功能，同时具有来源广 泛，取材方便与供区损伤小的优点，是理想的成体干细胞来源。目前对于人小涎腺 组织中的成体干细胞的研究很少，无详细的报道。上皮一间质共培养是经典的体外组 织构建模式，可用于器官再生和发育研究。由人小涎腺