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课题:DNA重组技术的基本工具
【自主预习1】(阅读教材内容,完成下列问题,并在书中相应位置用横线标注)
一、基因工程的概念
基因工程又叫做 基因拼接 技术或 DNA重组 技术,是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外 DNA重组 和 转基因 等技术,赋予生物以新的 遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的 生物类型 和 生物产品 。
【课内探究1】(结合已学知识,思考下列问题。将不能完成的问题用红笔画出来,并在小组内讨论交流,将交流结果整理在学案上)
基因工程所遵循的基本生物学原理是什么?
基因重组(碱基互补配对、基因结构相同、共用一套密码子等)
【自主预习2】(阅读教材内容,完成下列问题,并在书中用横线标注)(随机展示)
二、基因工程中的工具
1.限制性核酸内切酶
⑴简称: 限制酶 。(Pr)
⑵来源:主要是从 原核生物 中分离纯化而来的一类酶。
⑶种类:约4000种。
⑷功能:识别双链DNA分子某种 特定核苷酸序列 ;使每一条链中 特定部位的两个核苷酸之间 的 磷酸二酯键 断开。(专一性)
⑸酶切后的DNA末端: 粘性末端 、 平末端 。
2.DNA连接酶
⑴作用:将两个DNA分子片段“ 缝合 ”起来,恢复被 限制酶 切开了的
两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 。
⑵种类: E.coli DNA连接酶 和 T4 DNA连接酶 。
3.基因进入受体细胞的载体
⑴必备条件:①能够在受体 细胞 中进行 自我复制 ,或整合到 染色体DNA 上,
随 染色体DNA 进行同步复制。
②多个 限制酶切割位点 ,供外源DNA片段插入;
③具有 标记基因 ,便于鉴定和选择。
⑵载体的种类:①质粒:是一种 裸露 的、结构 简单 、独立于细菌 拟核DNA 之外,并具有 自我复制 能力的 很小的双链环状DNA 分子。
② 入噬菌体 的衍生物。
③ 动植物 病毒。
⑶真正被用作载体的质粒是 在天然质粒的基础上进行人工改造 的。
【课内探究2】(结合已学知识,思考下列问题。将不能完成的问题用红笔画出来,并在小组内讨论交流,将交流结果整理在学案上)
1. 限制酶主要存在于什么生物中?作用是什么?为什么不剪切自身的DNA?
答:原核;将外源入侵的DNA降解掉(“免疫”);生物在长期演化过程中,含有某种限制酶的细胞,其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列,或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上,限制酶不能将其切开。
2. DNA连接酶和DNA聚合酶有哪些异同?
答:同:都连接双链DNA的缺口,而不能连接单链DNA;都是形成磷酸二酯键;都是由蛋白质构成的酶
异:①DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上,而DNA连接酶是在
两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
②DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,DNA连接酶不需要模板
3. 作为载体还需具有哪些条件?为什么只有具备这些条件才能充当载体?天然质粒为什么不可以直接用做基因工程载体呢?
答:①载体DNA必须是安全的,不会对受体细胞有害 ②载体DNA分子大小应适合,以便提取和在体外进行操作(其余见上)
天然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件,需要进行人工改造
【课堂反馈】
1.下列四条DNA分子,彼此间具有粘性末端的一组是 ( D )
A.①② B.②③ C.③④ D.②④
【归纳总结】
课题:基因工程的基本操作程序(第1课时)
【自主预习1】(阅读教材第8页内容,完成下列问题.)
基因工程的基本操作程序:
1. 目的基因 的获取。 2. 基因表达载体 的构建。
3.目的基因导入 受体细胞 ,得到转基因生物。 4.目的基因的 检测与鉴定 。
【自主预习2】 (阅读教材第8-11页,完成下列问题,并将其背会。)
一、目的基因的获取
1.目的基因主要是指 编码蛋白质的结构基因 。
2.获得目的基因的方法:
⑴从基因文库中获取目的基因
①基因文库的含义 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。
③目的基因的获取依据: 基因的核苷酸序列 、基因的功能、 基因在染色体上的位置 、基因的 转录产物mRNA ,以及基因的 表达产物蛋白质 。
⑵利用PCR技术扩增目的基因
①PCR的含义: 是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术 。
②前提条件:有一段已知目的基因的 核苷酸 序列,以便根据该序列合成 引物 。
③过程: 目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸 。
④扩增方式:指数扩增,数量约为
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