第3章值氨基酸下.docVIP

第四节 氨基酸的化学反应 一、α-氨基参加的反应 与亚硝酸的反应测量氮气的体积可计算氨基酸的含量。 与酰化试剂的反应可用于氨基的保护。 烃基化反应可用于测定多肽链的氮末端氨基酸。 形成西佛碱的反应为转氨基反应的中间步骤。 脱氨基反应为氨基酸分解反应的重要中间步骤。 二、α-羧基参加的反应 成盐和成酯反应可用于羧基的保护。 成酰氯反应可用于羧基的活化。 脱羧基反应是生成胺类的重要反应。 叠氮反应可用于羧基的活化。 三、α-氨基和α-羧基共同参加的反应 （一）与茚三酮的反应 常用于氨基酸的定性或定量检测。 （二）成肽反应 四、侧链R 基参加的反应 酪氨酸可发生碘化、硝化、重氮反应，后者可用于检测酪氨酸。 组氨酸可发生重氮反应。 精氨酸可与环己二酮发生缩合反应，曾被用于氨基酸序列分析。 色氨酸可被N-溴代琥珀酰亚胺氧化，生成有色化合物，可用于色氨酸定量测定。 半胱氨酸可生成烷基衍生物，可用于巯基的保护。巯基可与重金属生成盐，使蛋白质失活。巯基在空气中可被氧化，金属离子对此有催化作用。 胱氨酸的二硫键可被还原为两个巯基。也可以被过甲酸氧化成两个磺酸基。 第五节 氨基酸的光学活性和光谱性质 一、氨基酸的光学活性和立体化学 氨基酸的不对称碳原子可用D-或L-表_________示，其比旋值可用于氨基酸的鉴别。 二、氨基酸的光谱性质 芳香族氨基酸的紫外吸收光谱如下图所示。 这一性质可用于蛋白质的定量测定。 三、氨基酸的核磁共振（NMR） 在外加磁场的作用下，原子核的自旋方向达到一致，可以和一定频率的外加磁场共振而形成吸收峰，同一种原子核在分子中的位置不同，因其外围的电子云对核的屏蔽作用引起的吸收峰位置移动（化学位移）也不同，由吸收峰的位置可以推断原子处于哪一个基团，在1H NMR 谱中，当相邻基团上有n 个质子时，该基团的质子吸收峰将分裂成n+1 个峰。 第六节 氨基酸混合物的分析分离 一、分配层析法的一般原理 逆流分溶符合二项式的展开式，但对于纸层析和柱层析来说，有关的计算无实际意义。 分配系数=物质在流动相中的总量/物质在固定相中的总量 二、分配柱层析 可以同检测器、记录仪、馏分收集器、输液泵构成层析系统。 三、纸层析 Rf 主要与R 基的极性有关，溶剂的PH 可影响R 基的极性，氨基酸与滤纸的吸附作用也影响Rf。 四、薄层层析 速度快，硅胶等支持物可以使用较强烈的显色方法。 五、离子交换层析 离子交换树脂的结构如图所示，功能基团种类较多。 氨基酸的离子交换分离原理： 若pI?pH0，两性离子带净正电荷，若pI?pH0，两性离子带净负电荷，差值越大，所带的净电荷越多。 用氨基酸自动分析仪分析氨基酸混合物的洗脱曲线（阳离子交换剂）。 六、气液层析 七、高效液相层析 HPLC 分析氨基酸混合物的洗脱曲线。