第十章有机高分子基质的hpl瘤c填料20120406.ppt

1、 HPLC与经典LC区别 主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段 2、HPLC与GC差别 5. 高效液相色谱仪 一、液体输送系统 二、梯度洗脱装置 三、进样系统 四、馏分收集器 五、检测系统 六、色谱分离系统 一、液体输送系统——高压输液泵 用于输送流动相，由于色谱柱很细、为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm）、流动液的扩散系数远小于气体，故液体的流动相高速通过时，液体流动时阻力很大，必须要有很高的柱前压力。 压力：150～350×105 Pa，高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 流量稳定（影响重现性及分析精度）、流速可调 应具有压力平稳、脉冲小、耐腐蚀等特性 恒流泵——柱塞往复泵 二、梯度淋洗装置 gradient elution 又称梯度洗提、梯度洗脱，与气相色谱中的程序升温一样，可极大地改善分离效果 载液中含有两种及以上的不同极性（或不同性质）的溶剂，在分离过程中按照一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素。 通过梯度洗脱，可缩短分离时间、提高分辨能力、改善峰形，还可提高分析精度。 二、梯度洗脱装置 四、馏分收集器 HPLC：柱后流出物中被分离组分在室温下都以溶液形式存在，溶剂挥发后可得到纯组分 →收集纯馏分做进一步鉴定、考察； →或者是为了获得足够量的纯产品 自动馏分收集器 五、检测系统 1、紫外检测器: 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 作用原理：被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律 特点：灵敏度高； 线形范围高； 波长可选，易于操作； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 应用可变波长检测器，以选择最佳检测波长。 2、示差折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最多的检测器； 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值，差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低（10-7g/ml） 对温度敏感 不能用于梯度洗脱why？ （凝胶渗透色谱中最为常用） 3、荧光检测器（fluorescence detector） 受紫外光激发后能够辐射出比紫外光波长较长的光 高灵敏度(比紫外检测器高两个数量级，达10-11 g/ml)、高选择性； 对多环芳烃，维生素B 黄曲霉素、卟啉类化合物 农药、药物、氨基酸 甾类化合物等有响应； 4、电导检测器（electrical conductivity detector） 属电化学检测器，是离子色谱法中应用最为广泛的检测器 作用原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质的含量。 六、色谱分离系统 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 装柱方法：有干法和湿法两种，按粒度20μm划分，湿法装柱又称匀浆法。 HPLC操作过程演示 商品HPLC外观 6. 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 (1)液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatography (2)液-固吸附色谱 liquid- solid adsorption chromatography (3)离子对色谱 ion-pair chromatography (4)离子交换色谱 ion-exchange chromatography (5)离子色谱 ion chromatography (6)空间排阻色谱 steric exclusion chromatography (1) 离子色谱法（IC） 离子色谱法是由离子交换色谱法派生出来的一种分离方法。 对于那些不能采用紫外检测器的被测离子，如采用电导检测器，由于被测离子的电导信号被强电解质流动相的高背景电导信号掩没而无法检测。使得离子交换色谱法在无机离子的分析和应用受到限制。 1975年Small等人通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相，从而用电导检测器可直接检测各种离子的含量。这种色谱技术称为离子色谱。 (1)离子色谱法（IC） 若样品为阳离子，用无机酸作流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换剂。当试样经阳离子交换剂的分离往后，随流动相进入抑制柱，在抑制柱中发生两个重要反应： R+－OH＋H+Cl- -→R+－Cl十H2O R+一OH-＋M+Cl--→M+OH－＋R+－Cl- 由反应可见：经抑制柱后，一方面将大量酸转变为电导很小的水，消除了流动相本底电导的影响。同时，又将样品